一种盐生杜氏藻中微量元素含量测定方法

摘要

本发明公开了一种盐生杜氏藻中β-胡萝卜素和叶绿素a含量测定方法，属水产养殖领域。β-胡萝卜素含量测定传统上是将β-胡萝卜素标准品用石油醚-异丙醇混合液稀释成系列浓度的标准品溶液，将所得的样品溶液进行液相色谱分析，从而得知样品中β-胡萝卜素含量。该法结果准确，测试费用低，但耗时长，设备昂贵，操作繁琐。海藻中叶绿素测定传统上采用分光光度计法，操作麻烦，技术性强，设备昂贵。本发明公开的萃取法测定盐生杜氏藻中β-胡萝卜素和叶绿素a含量，操作简便，耗时短，结果准确，费用低，可一次完成多个样品的测定。

主权项

一种盐生杜氏藻中微量元素含量测定方法，其特征在于步骤如下：所述微量元素为β‑胡萝卜素和叶绿素a，1)β‑胡萝卜素含量的测定方法步骤1将盐生杜氏藻培养至第13天时，藻细胞密度可达到250×10⁴‑400×10⁴cell/每毫升，用移液管移取藻液100毫升，装入250毫升的三角烧瓶中；步骤2加入15克NaCl，加入80％乙二醇(由乙二醇和蒸馏水按80∶20体积比混合而成)120毫升，保鲜膜封口，橡皮筋扎紧，放在摇床上摇匀20分钟，充分萃取；步骤3此时液体分成上清液和下浊液，用20毫升的移液管移取上清液，加入到250毫升的容量瓶中，用80％乙二醇定容至250毫升；步骤4转入250毫升圆底烧瓶中，在摇床上摇匀60分钟，用721型分光光度计测定在波长425nm时的吸光值OD₄₂₅，用下式计算β‑胡萝卜素含量β‑胡萝卜素含量(mg/L)＝(最后定容体积×9.84×OD₄₂₅)÷(2.91×藻液取样体积)最后算出的β‑胡萝卜素含量单位是(mg/L)，即每升藻液中含有的β‑胡萝卜素毫克数；2)叶绿素a含量的测定方法步骤5将盐生杜氏藻培养至第9天时，藻细胞密度可达到150×10⁴‑300×10⁴cell/每毫升，用量筒取藻液200毫升藻液，倒入500毫升的三角烧瓶中；步骤6加入20克硫酸亚铁，加入240毫升85％的丁酮(由丁酮和蒸馏水按85∶15体积比混合而成)，保鲜膜封口，橡皮筋扎紧，放在摇床上摇匀25分钟，充分萃取；步骤7此时液体分成明显的上下两层，上层清亮，下层浑浊，用移液管取上清液至500毫升的容量瓶中，用85％丁酮定容至500毫升，转入1000毫升烧杯中，保鲜膜封口，橡皮筋扎紧，置于摇床上摇匀15分钟；步骤8用分光光度计分别测定波长624nm和725nm时的吸光值OD₆₂₄、OD₇₂₅，用下式计算叶绿素a含量叶绿素a含量(mg/L)＝[(19.62×OD₆₂₄+4.83×OD₇₂₅)÷藻液取样体积]×最后定容体积最后算出的叶绿素a含量单位是mg/L，即每升藻液中含有的叶绿素a毫克数。