一种牡丹组织培养生根新方法

摘要

本发明以豆绿、岛锦和海黄牡丹的鳞芽作为外植体，在无菌条件下采用三步消毒法对鳞芽进行消毒处理，经过“无菌株系的建立”、“继代增殖培养”和“诱导生根培养”三个环节获得组培生根苗，生根率分别为豆绿50.0%～66.7%、岛锦33.3%～86.7%、海黄31.4%～73.5%。

主权项

一种牡丹组织培养生根方法，其特征在于由“无菌株系的建立”、“继代增殖培养”和“诱导生根培养”三个环节组成，在诱导生根培养基中加入三十烷醇（TA），配以生长素促进生根，无菌株系的建立：以牡丹鳞芽作为外植体，在无菌条件下采用三步消毒法进行消毒处理，鳞芽接种于诱导培养基诱导鳞芽萌发，诱导培养基以WPM培养基为基本培养基，加入6‑BA0.1～1.0mg/L、NAA0.01～0.1mg/L、蔗糖30g/L和琼脂6g/L，不定芽形成，无菌株系建成；继代增殖培养：把不定芽切割，接种于增殖培养基诱导形成丛生芽，再将丛生芽分割成带1～2个芽的小芽丛，接种于相同的培养基上继续进行继代增殖培养，增殖培养基以WPM为基本培养基，加入6‑BA0.5～3.0mg/L、NAA0.01～0.1mg/L、AC0～2g/L、蔗糖30g/L、琼脂6g/L；诱导生根培养：选取增殖培养中的健壮丛生芽接种到生根培养基进行生根诱导培养，形成生根苗，生根培养基以MS为基本培养基，大量元素减半，再加入IBA1.0～5.0mg/L、NAA0.1mg/L、TA0.1～2g/L、蔗糖30～50g/L、琼脂6g/L；鳞芽消毒处理所采用的三步消毒法为：第一步用75%的乙醇消毒30～60s，第二步用1%的次氯酸钠消毒8～15 min，取出用无菌水冲洗，第三步用0.5%的次氯酸钠消毒10～20min，取出再用无菌水冲洗干净，整个消毒过程中不断地摇动三角瓶，使消毒剂与鳞芽充分接触；无菌株系的建立、继代增殖培养和诱导生根培养三个环节的条件相同，均为温度25±2℃，光照强度2000Lx，光照时间14h/d；选用的牡丹品种为海黄、岛锦和豆绿。