一种MIT引物设计方法和利用高通量测序构建浮游动物条形码数据库的方法

摘要

本发明公开了一种MIT引物设计方法和利用高通量测序构建浮游动物条形码数据库的方法，属于生物技术领域。本发明设计的MIT引物由测序接头序列、8-12个碱基的barcode序列和常规PCR引物组成；本发明中利用高通量测序构建浮游动物条形码数据库的方法包括：单个体裂解法提取DNA、线粒体DNA(MIT)引物PCR扩增、PCR扩增产物纯化及定量、高通量测序和序列分析，本方法采用特殊的MIT引物，避免了测序文库的构建，通过高通量测序可一次性的获得大量的条形码序列，操作方便，快速，经济，便于推广应用，能高效的构建各种动物条形码数据库。

主权项

一种MIT引物设计方法，其步骤为：(ⅰ)选取PCR上、下游引物；(ⅱ)将高通量测序平台的测序接头A连接在PCR上游引物中得到MIT初始上游引物，将高通量测序平台的测序接头P1连接在PCR下游引物中得到MIT初始下游引物；(ⅲ)设计不同的MIT barcode序列，长度为8‑12bp，MIT barcode序列中GC碱基的含量为40‑60％；(ⅳ)将步骤(ⅲ)中设计的MIT barcode插入步骤(ⅱ)中得到的MIT初始上游引物的接头A与PCR上游引物之间得到MIT上游引物。