特定发育阶段血吸虫miRNA关键靶基因的分析与鉴定方法

摘要

本发明涉及一种特定发育阶段血吸虫miRNA关键靶基因的分析与鉴定方法，属于生命医学科学领域。本方法采用生物信息学分析，找出血吸虫基因组中某miRNA靶基因群，而后利用Solexa分析虫体在该miRNA高或低表达时期虫体差异表达基因群，并与该miRNA靶基因群取交集，得到候选关键基因群，而后结合KEGG分析找出其中重要基因，初步确定关键靶基因群；然后利用该miRNA类似物(mimic)体外实验，进一步筛选出关键靶基因，再结合荧光素酶报告系统进一步确认该miRNA与该基因的靶向关系。本方法的建立有助于鉴别特定时期miRNA的关键靶基因，有助于迅速揭示miRNA的调控作用，为miRNA功能研究提供了理想途径。同时也对其它物种相近研究方法的建立提供有价值的参考。

主权项

一种特定发育阶段血吸虫miRNA关键靶基因的分析与鉴定方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)分析特定发育阶段血吸虫的特征性miRNA表达：通过Solexa分析，比较日本血吸虫不同发育时期miRNA表达特点，从中确定特定发育阶段血吸虫的特征性miRNA；(2)特定发育阶段血吸虫的基因表达谱分析：通过Solexa分析并比较特定发育阶段血吸虫的基因表达谱，从中找到高表达的基因和低表达的基因，即差异表达基因群；(3)特定发育阶段血吸虫的特征性miRNA关键基因的分析：通过生物信息学预测该miRNA在本物种内所有靶基因，并与特定发育阶段差异表达的基因群取交集，获得两群中共有基因，分析其中参与关键代谢通路的基因，将之定为特定发育阶段血吸虫特征性miRNA的“候选关键靶基因”，简称关键基因；(4)确定关键基因中的靶基因：利用该miRNA类似物进行体外实验，以筛选出关键基因中的靶基因；利用生物信息学分析关键基因3’UTR区的miRNA结合位点；结合Luciferase荧光素酶报告系统进一步确认该miRNA与该基因3’UTR区调控关系。