发明名称 |
南方大口鲶肌肉细胞系的构建方法 |
摘要 |
本发明公开了一种南方大口鲶肌细胞系的构建方法,它是以南方大口鲶背肌为材料,采用组织块贴壁法启动原代培养,在含胎牛血清、表皮生长因子和成纤维生长因子的MEM培养液中培养,采用胰蛋白酶消化法进行传代培养。由本发明构建的南方大口鲶肌细胞系,目前已传至第56代,其工艺科学合理,且细胞系未经过任何病毒或癌基因转染,可作为环境毒理学研究环境污染的模型,对水体中存在的各种环境污染物进行污染监测和安全性评价。 |
申请公布号 |
CN104403994A |
申请公布日期 |
2015.03.11 |
申请号 |
CN201410729274.4 |
申请日期 |
2014.12.02 |
申请人 |
华中农业大学 |
发明人 |
汤蓉;王敏;鲁元安;李大鹏 |
分类号 |
C12N5/077(2010.01)I;C12R1/91(2006.01)N |
主分类号 |
C12N5/077(2010.01)I |
代理机构 |
武汉开元知识产权代理有限公司 42104 |
代理人 |
马辉 |
主权项 |
一种南方大口鲶肌细胞系的构建方法,其特征在于:包括以下步骤:1)首先将体质健康的南方大口鲶置于含有浓度为1000单位/mL的青霉素和链霉素的水溶液中饲养36~60h,2)取出南方大口鲶置于体积分数为75%的酒精中浸泡1~2min后,在超净工作台内无菌剪下背肌,并将背肌置于AIM培养基中浸泡2~3h,其中,25~35min更换一次AIM培养基,3)将步骤2)浸泡的背肌用眼科剪剪碎成1mm<sup>3</sup>的小块,然后用AIM培养基冲洗2~3次,收集20~25个组织小块贴到25cm<sup>2</sup>的原代细胞培养瓶底部,在室温下干贴2~4h后,将培养瓶侧放半小时后,吸出过多的培养液,每个培养瓶中缓慢注入4~6mL升的南方大口鲶肌细胞增殖培养液,在22~25℃生化培养箱中培养,观察并记录培养情况,每隔2~3天用移液管吸出旧的培养基,并离心,然后吸出2~3mL的上清液再加上2~3mL的南方大口鲶肌细胞增殖培养液;即得到南方大口鲶肌细胞系。 |
地址 |
430070 湖北省武汉市洪山区狮子山街1号 |