| 主权项 |
一种快速检测发酵液中L‑谷氨酰胺含量的方法，其特征在于：包括以下步骤：步骤一、取谷氨酰胺的生产菌株，活化后接入种子罐进行培养，然后以10%的接种量移种至发酵培养基中进行培养，得到发酵液，备用；步骤二、取步骤一得到的发酵液，先置于涡旋振荡器中振荡2‑4min，振荡结束后取1.5mL置于离心管中在10000rpm条件下离心3‑5min，得到待测液，备用；步骤三、按照3:1:0.2‑0.5的体积比取正丙醇、氨水和甲醇，混合均匀，得到展开剂，备用；配制质量浓度为0.2‑0.5%的茚三酮丙酮溶液，得到显色剂，备用；按照2:25:7‑10的体积比为取质量浓度为0.1%的CuSO<sub>4</sub>溶液、乙醇溶液和质量浓度为10%的乙酸溶液，混合均匀，得到洗脱液，备用；步骤四、配制0.5g/L、1g/L、2g/L、3g/L 、4g/L 、5g/L 、6g/L 、7g/L 、8g/L 、9g/L和 10g/L谷氨酰胺的标准溶液，先在薄层硅胶板上进行点样，每个点0.2uL，然后置于层析缸中展开，展开完成后置于烘箱中在105℃条件下烘干3‑5min，烘干完成后喷洒步骤三得到的显色剂进行显色，然后再将薄层硅胶板置于烘箱中在110‑120℃条件下烘干2min，烘干结束后用刀将显色斑点刻下，再将刻下的硅胶于试管中用10mL洗脱液洗脱25‑30min，然后用紫外‑可见光分光光度计测定其在515nm处的吸光值，绘制标准曲线，备用；步骤五、取步骤二得到的待测液在薄层硅胶板上进行点样，每个点0.2uL，然后置于层析缸中展开45min，层析缸中盛放有步骤三得到的展开剂，展开完成后置于烘箱中在105℃条件下烘干3‑5min，烘干完成后喷洒步骤三得到的显色剂进行显色，然后再将薄层硅胶板置于烘箱中在110‑120℃条件下烘干2min，烘干结束后用刀将显色斑点刻下，得到含酸硅胶，备用；将上述得到的含酸硅胶置于10ml步骤三得到的洗脱液中，洗脱25‑30min后，取样，用紫外‑可见光分光光度计测定其在515nm处的吸光值，每个样品测定三次，然后在步骤四得到的标准曲线中取得对应值，即得到发酵液中L‑谷氨酰胺的含量。 |
