禽流感病毒HA基因重组腺病毒的制备方法

摘要

本发明提供了一种禽流感病毒HA基因重组腺病毒的制备方法，该方法创新性的利用质粒pCAGGS、腺病毒穿梭质粒pShuttle、腺病毒骨架质粒pAdEasy-1等，经一系列中间过程，得到基因表达质粒等中间产物，将最后得到的重组腺病毒质粒转染293细胞；根据腺病毒感染形成的细胞病变及特异细胞免疫组化筛选重组病毒。该方法以CAG为启动子表达目的基因，显著提升了目的基因的表达水平，同时利用该方法构建的分别表达H5N1与H9N2亚型禽流感病毒血凝素蛋白重组腺病毒，为H5、H9亚型禽流感病毒双价核酸疫苗的研制提供病毒模型，也为AIV腺病毒活载体疫苗的研制奠定基础。

主权项

一种禽流感病毒HA基因重组腺病毒的制备方法，该方法包括以下步骤：1)将具有禽流感病毒HA基因的片段连接到腺病毒穿梭质粒上，将连接产物导入大肠杆菌中扩增，而后提取重组腺病毒穿梭质粒；2)将步骤1)提取得到的重组腺病毒穿梭质粒经单酶切后导入含有腺病毒骨架质粒的大肠杆菌中进行同源重组，而后提取重组腺病毒质粒；3)将步骤2)提取得到的重组腺病毒质粒线性化后转染293细胞，包装，即得到禽流感病毒HA基因重组腺病毒；其特征在于：所述具有禽流感病毒HA基因的片段是连接有CAG启动子的禽流感病毒HA基因片段。