METODOLOGIA IN VITRO PARA SELEÇÃO DE SUBSTÂNCIAS COM POTENCIAL ATIVIDADE ANTIPARASITÁRIA E IMUNOLÓGICA, UTILIZANDO A CITOMETRIA DE FLUXO

摘要

METODOLOGIA IN VITRO PARA SELEÇÃO DE SUBSTÂNCIAS COM POTENCIAL ATIVIDADE ANTIPARASITÁRIA E IMUNOLÓGICA, UTILIZANDO A CITOMETRIA DE FLUXO. A presente invenção diz respeito a um método in Vitro para prospecção pré-clinica de substâncias sintéticas, extratos vegetais e produtos naturais quanto ao seu potencial anti-leishmanicida e imunotóxico, visando á seleção de moléculas para estudos posteriores para o desenvolvimento de fármacos para o tratamento de doenças negligenciadas como as leishmanioses. Estas metodologia in vitro pode ser descrita sucintamente em 4 etapas: (a) cultivo e marcação de Leishmania com isotiocianato de fluoresceína (FITC). (b) Incubação para promover a fagocitose dos parasitos-FITC pelos monócitos do sangue periférico na presença das moléculas candidatas a novas drogas; (c) marcação de monócitos sanguíneos com anticorpo anti-CD14 conjugado ao fluorocromo fico eritrina (PE), lise de eritrócitos e lavagem das amostras e avaliação da redução da fagocitose como indicativo da atividade anti-parasitária de substâncias puras, extratos brutos ou outros produtos naturais a serem testados; (d) marcação dos monócitos/macrófagos com 7-amino actinomicina (7-AAD) seguindo-se a leitura das amostras e análise de dados por citometria de fluxo.