一种小分子羊胎素的提取方法及在护肤品领域的运用

摘要

本发明公开了属于生物技术领域的一种小分子羊胎素的提取方法及在护肤品领域的运用。其提取方法为采用同期发情获得大量的同期怀孕羊，并在怀孕85-100天时手术法取出胎羊，取躯体匀浆，反复冻融裂解细胞，高温变性、消毒、并沉淀杂蛋白，高速离心后采用30KD超滤去掉大分子杂蛋白及细菌、内源性病毒等有毒有害成分及杂质，获得纯净的小分子羊胎素产品并以1KD的超滤组件对小分子羊胎素产品进行超滤浓缩。本发明的小分子羊胎素可广泛的用于护肤品、美容产品、创伤愈合产品、保健品、科学研究等领域。本发明的方法为羊胎素的生产提供了一个重要的新途径，并首次鉴定了小分子羊胎素的组成成分，并为科学使用羊胎素提供了理论依据。

主权项

一种小分子羊胎素的提取方法，其特征在于，按照如下步骤进行：(1)挑选身体健康、年龄在2‑3岁、发情周期正常的经产母羊作为待孕羊，所有羊均已经检疫、防疫和药浴等处理，并在饲料中补充青饲料、维生素和微量元素；(2)在待孕羊在黄体期7‑14d时肌注氯前列烯醇，30h后开始观察发情，当观察到发情后12小时进行人工采精和输精，发情后24可复配一次，35天后进行B超检查，确定怀孕情况；(3)待胎羊长到85‑100天时，手术法取出胎羊，置于高温灭菌的容器内，用无菌生理盐水洗净，去除眼球、大脑、肝、肺、心、肠和胃；(4)用无菌生理盐水清洗，沥干水分，称重，用消毒过的剪刀把胎羊剪碎，放入灭菌过的匀浆机内匀浆；(5)加入生理盐水与胎羊碎块进行匀浆，匀浆液加入生理盐水稀释，生理盐水的总量是胎羊质量的2‑4倍，匀浆稀释液经不锈钢滤网过滤，上层50目，中层100目，下层200目；(6)匀浆滤过液置于消毒过的钢化玻璃托盘放置‑30℃冰箱，冰冻过夜，或储存；(7)取出冻存的匀浆滤过液室温解冻，至完全冻融，转入无菌离心容器内，3000‑5000rpm，离心8‑12分钟，弃沉淀；(8)上清转入无菌耐热容器，置于60‑80℃水浴，60‑80℃保温20‑40分钟，充分杀灭胎羊可能从母体带入的病毒以及变性杂蛋白；(9)迅速放入‑30℃冰箱冷却至‑1‑1℃，或冻存；(10)转移液体至灭菌的离心容器，3000‑5000rpm，离心20‑40分钟，弃沉淀；(11)上清转入灭菌容器，使用切向流超滤系统，根据上清的体积使用不同的系统，超滤；(12)滤膜超滤后分成两部分，浓缩液大于30KD的杂蛋白，弃用；滤过液为小于30KD的小分子蛋白；使用切向流超滤系统对滤过液进行超滤浓缩，得到浓缩液及滤过液，对浓缩液进行0.22ug过滤除菌，‑80℃冻存。