一种鉴定发酵酸面团中细菌菌相组成的方法

摘要

本发明公开了一种鉴定发酵酸面团中细菌菌相组成的方法，包括：将发酵酸面团用淀粉酶酶解，得到酶解物；从酶解物中提取细菌总基因组DNA；以提取的细菌总基因组DNA为模板，利用带有GC夹子的细菌通用引物341f-GC与543r进行第一轮PCR扩增；以第一轮PCR扩增后得到的阳性产物为模板，利用细菌通用引物341f与543r进行第二轮PCR扩增；对第一轮PCR扩增和第二轮PCR扩增的产物进行分析，确定发酵酸面团中细菌菌相组成。本发明对发酵酸面团先进行酶解后再进行PCR扩增，然后通过变性梯度凝胶电泳分离，从分子水平对传统发酵酸面团中细菌菌相组成进行了鉴定，具有稳定、高效、成本低的特点，为开发我国传统发酵食品中微生物资源提供参考。

主权项

一种鉴定发酵酸面团中细菌菌相组成的方法，包括：(1)将发酵酸面团用淀粉酶在60‑65℃下酶解20‑30min，得到酶解物；(2)从酶解物中提取细菌总基因组DNA，提取细菌总基因组DNA后，将DNA的浓度调整为45‑55ng/uL；(3)以提取的细菌总基因组DNA为模板，利用带有GC夹子的细菌通用引物341f‑GC与543r进行第一轮PCR扩增；(4)以第一轮PCR扩增后得到的阳性产物为模板，利用细菌通用引物341f与543r进行第二轮PCR扩增；细菌通用引物341f‑GC的碱基序列如SEQ ID NO.2所示，细菌通用引物341f的碱基序列如SEQ ID NO.1所示，细菌通用引物543r的碱基序列如SEQ ID NO.3所示；(5)对第一轮PCR扩增和第二轮PCR扩增的产物进行分析，确定发酵酸面团中细菌菌相组成；所述的淀粉酶为α‑淀粉酶；所述的发酵酸面团与淀粉酶的重量比为0.5:1‑1:1；所述的第一轮PCR为降落PCR；步骤(5)中，所述的分析包括如下步骤：合并第一轮PCR扩增和第二轮PCR扩增的产物并纯化，然后进行变性梯度凝胶电泳分离，将得到的扩增条带进行染色、纯化、克隆测序，之后与标准菌序列比对，判定细菌种类；所述的变性梯度凝胶电泳的变性梯度为30％‑60％，电泳电压为48‑52V，电泳时间为12‑13h。