一种转基因大豆及其衍生品种的Arm-PCR检测方法

摘要

本发明公开了一种转基因大豆及其衍生品种的Arm-PCR检测方法，转基因大豆及其衍生品种为转基因大豆GTS40-3-2、Mon89788、A5547-127及其衍生品种，其Arm-PCR检测引物组包括内参Lectin引物组、特异性的套式PCR引物、超级上游引物Fs和超级下游引物Rs，特异性的套式PCR引物用于Arm-PCR的第一步扩增，超级上游引物Fs和超级下游引物Rs用于Arm-PCR的第二步扩增，检测试剂盒包括引物液、反应液、DNA聚合酶和对照，采用六对套式引物和一对超级引物，在DNA聚合酶的作用下，对DNA模板进行扩增，用毛细管电泳检测扩增结果。本发明具有低成本、快速、高通量和阳性检出率高等优势，并具有兼容性、特异性、敏感性、半定量性、灵活性、重复性和高效性。

主权项

一种转基因大豆及其衍生品种的Arm‑PCR检测方法，其特征在于，所述转基因大豆及其衍生品种为转基因大豆GTS40‑3‑2、Mon89788、A5547‑127及其衍生品种，所述转基因大豆GTS40‑3‑2、Mon89788、A5547‑127及其衍生品种的Arm‑PCR检测引物组包括内参Lectin引物组、特异性的套式PCR引物、超级上游引物Fs和超级下游引物Rs，所述特异性的套式PCR引物包括正向外引物Fo、反向外引物Ro、正向内引物Fi、反向内引物Ri，所述特异性的套式PCR引物用于Arm‑PCR的第一步扩增，所述超级上游引物Fs和超级下游引物Rs用于Arm‑PCR的第二步扩增；所述内参Lectin引物组、特异性的套式PCR引物、超级上游引物Fs和超级下游引物Rs的核苷酸序列分别如下所示：GTS40‑3‑2正向外引物Fo：CTTCCCGTTACCTTGCGCGG；GTS40‑3‑2反向外引物Ro：CGGTGAGCTTGCCGCGGCCT；GTS40‑3‑2正向内引物Fi：GCAGTCGTGCAGCAAGTTTTACGTCCGCCGTGCTGCTCGCCG；GTS40‑3‑2反向内引物Ri：CGAGTCCTGCGGTCTCAAATGTCAGGCGGATGGTGCGCACGC；Mon89788正向外引物Fo：GAGACTGATGCTGACGGTGT；Mon89788反向外引物Ro：CACTTCGATGTCGGCACCCA；Mon89788正向内引物Fi：GCAGTCGTGCAGCAAGTTTTACTGCTTTCCCATTGGTTGCT；Mon89788反向内引物Ri：CGAGTCCTGCGGTCTCAAATGTATGAGACCAGTACGGGTTGG；A5547‑127正向外引物Fo：GGACAGGGTACCCGGGGATC；A5547‑127反向外引物Ro：TAGCCTTCCAGGGCCCAGCG；A5547‑127正向内引物Fi：GCAGTCGTGCAGCAAGTTTTACGCTGATATGGCCGCGGTTTG；A5547‑127反向内引物Ri：CGAGTCCTGCGGTCTCAAATGTGTGGTGTTTGTGGCTCTGTC；Lectin正向外引物Fo：CCAAGTCATCGACGTGCCGG；Lectin反向外引物Ro：GCCACGTCTTCGCCGCCGGC；Lectin正向内引物Fi：GCAGTCGTGCAGCAAGTTTTACGCCTTCCCGCTGGTTGCGGC；Lectin反向内引物Ri：CGAGTCCTGCGGTCTCAAATGTGATGACTTCGATGTCGGCGC；超级上游引物Fs：GCAGTCGTGCAGCAAGTTTTAC；超级下游引物Rs：CGAGTCCTGCGGTCTCAAATGT。