高分解能３Ｄ蛍光顕微鏡法のための顕微鏡および方法

摘要

試料（２）内で蛍光発光体を繰り返し励起して蛍光放射線を放出させ、顕微鏡（１）を用いて試料（２）の単一画像（１０）を生成する。各単一画像（１０）では蛍光発光体の少なくとも１つの部分集合が隔離されている。単一画像（１０）において、光学的分解能を超える位置精度で蛍光発光体の位置を局在化する。これを元に高解像度の全体画像を生成する。顕微鏡の撮像光路には、単一画像（１０）の少なくともいくつかの生成の際に非点収差を生じさせるように設定される適応ミラー（７）を設ける。これにより、焦点面の上方に位置する蛍光発光体が第１の方向に、焦点面の下方に位置する蛍光発光体が第２の方向に歪められた、非点収差のある単一画像（１５）を撮影する。その回転非対称性から蛍光発光体に関する深さ位置データを導出する。追加的に、適応ミラー（７）がいくつかの単一画像（１０）の生成の際に非点収差を生じさせないように、適応ミラー（７）を設定する。非点収差のない単一画像（１６）において、蛍光発光体の回転非対称な画像（１１）を検出する。非点収差のある単一画像（１５）における深さ位置データの導出の際に、これらの蛍光発光体に深さ位置補正を施すか、またはこれらの蛍光発光体を抑制する。