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<p>Un método de amplificación específica de alelo de una variante de una secuencia diana, en el que la amplificación implica la reacción en cadena de la polimerasa (PCR), la secuencia diana puede existir en forma de varias secuencias variantes, comprendiendo el método (a) hibridación de un primer y un segundo oligonucleótidos a la secuencia diana; en el que el primer oligonucleótido es al menos parcialmente complementario a la secuencia diana, y el segundo oligonucleótido es al menos parcialmente complementario sobre su porción 3' y 5' de la secuencia diana, y tiene al menos un nucleótido selectivo complementario a solo una variante de la secuencia diana, en el que dicho nucleótido selectivo se coloca 10 internamente del extremo 3', y en donde dicho segundo oligonucleótido comprende al menos un nucleótido con una base covalentemente modificada en el grupo amino exocíclico, en el que el grupo amino exocíclico es el grupo amino en la posición 6 de la adenosina, en la posición 2 de la guanosina o en la posición 4 de la citidina; (b) proporcionar condiciones para la hibridación de dicho primer y segundo oligonucleótidos al menos a una variante de la secuencia diana, adecuada para la extensión del oligonucleótido por una polimerasa de ácido nucleico, en el que dicha polimerasa es capaz de extender dicho segundo oligonucleótido preferentemente cuando dicho segundo oligonucleótido se hibrida con dicha variante de la secuencia diana que es complementaria a dicho nucleótido selectivo, y sustancialmente menor cuando dicho segundo oligonucleótido se hibrida con dicha variante de la secuencia diana que no es complementaria a dicho nucleótido selectivo; y (c) repetir la secuencia de pasos de hibridación y extensión múltiples veces.</p> |
