一种密度感应淬灭菌的检测方法

摘要

本发明涉及一种密度感应淬灭菌的检测方法，是将待检测菌株加入到溶解有AHL的pH值为6.7的 PIPES缓冲液中制成待检液，再将待检液上清与添加有X-gal的A. tumefaciens A136报告菌的菌液进行反应；反应结束后检测反应液的OD492和OD630值，并通过公式 (0.653×OD492-OD630)/(0.267×OD630-OD492)计算标准化β-半乳糖苷酶活性值，通过比较标准化β-半乳糖苷酶活性值进行差异显著性分析，最终确定待检测菌株是否为密度感应淬灭菌。本发明的方法具有简单快速，灵敏度高，高通量检测，排除了大部分假阳性菌株，可以有效确定待测菌株是否为密度感应淬灭菌株，从而显著提高了密度感应淬灭菌株筛选的准确性和针对性，节省了时间和人力成本。

主权项

一种密度感应淬灭菌的检测方法，其特征在于，所述方法的步骤如下：1)待检测菌株的扩大培养将待测菌株接种到液体培养基中，在28℃，170rpm培养至稳定期获得待测菌液；2)待检液的反应：在步骤1)制备的待测菌液中加入pH值为6.7，浓度为1M的PIPES缓冲液和C6‑HSL，混匀28℃静置培养24小时；PIPES缓冲液在待检液中的体积浓度为10％，C6‑HSL在待检液中的终浓度为0.01mM；3)AHL分子的检测：将添加有终浓度为250μg/ml的X‑gal的A.tumefaciens A136报告菌的菌液与步骤2)的完成反应的待检液的上清混合，28℃静置培养12小时；检测OD492和OD630，然后按照(0.653×OD492‑OD630)/(0.267×OD630‑OD492)计算标准化β‑半乳糖苷酶活性值，通过差异显著性分析，比较阴性对照的标准化β‑半乳糖苷酶活性值，最终确定待检测菌株是否为密度感应淬灭菌；当待测菌的标准化β‑半乳糖苷酶活性值显著小于阴性对照的标准化β‑半乳糖苷酶活性值时，确定待测菌株为密度感应淬灭菌；其中检测菌液与待检液上清的体积比为19:1。