一种检测WNT信号通路的试剂、PCR检测方法及其应用

摘要

本发明提供了一种检测细胞内WNT信号通路的试剂、PCR检测方法及其应用，本发明所述检测试剂包括检测APC基因、AXIN1基因、AXIN2基因、BCL9基因、CCND1基因等84个基因的引物和内参ACTB基因、B2M基因、HPRT1基因、RPLP0的反应引物。本发明将涉及WNT信号分子集中在一个平板上，通过做一次实时荧光定量PCR反应，反应细胞的生存状态，与正常的肝癌、肝细胞做对比，探讨WNT信号通路在肿瘤/正常细胞中的可能途径，为研究关键蛋白的调控提供最直接的证据；本发明从转录水平快速准确的找到WNT信号通路相关分子，为抗癌药物筛选、新靶向药物的机制探讨等提供了有力的工具。

主权项

一种检测细胞WNT信号通路的试剂，其特征在于它包括以下引物：(1)检测AES基因的PCR反应引物，其引物序列如下：5'‑ACCCCAGCAACTCAAATTCA‑3'；5'‑AAGCCGTAGGACATCTCGTA‑3'；(2)检测APC基因的PCR反应引物，其引物序列如下：5'‑CCTCATCCAGCTTTTACATGG‑3'；5'‑GCCCGAGCCTCTTTACTG‑3'；(3)检测AXIN1基因的PCR反应引物，其引物序列如下：5'‑TGGAGCCCTGTGACTCGA‑3'；5'‑GGGACACGATGCCATTGTTAT‑3'；(4)检测AXIN2基因的的PCR反应引物，其引物序列如下：5'‑AGCCAAAGCGATCTACAAAAG‑3'；5'‑AAGTCAAAAACATCTGGTAGGC‑3'；(5)检测BCL9基因的的PCR反应引物，其引物序列如下：5'‑CCCCATCAAATGCTACAGC‑3'；5'‑TTTCAACCTGGCCCTTCAAA‑3'；(6)检测BTRC基因的的PCR反应引物，其引物序列如下：5'‑ACCAACATGGGCACATAAACT‑3'；5'‑TGGCATCCAGGTATGACAGAA‑3'；(7)检测CCND1基因的的PCR反应引物，其引物序列如下：5'‑GCTGCGAAGTGGAAACCAT‑3'；5'‑CCTCCTTCTGCACACATTTGA‑3'；(8)检测CCND2基因的的PCR反应引物，其引物序列如下：5'‑TTTGCCATGTACCCACCGT‑3'；5'‑AGGGCATCACAAGTGAGC‑3'；(9)检测CSNK1A1基因的的PCR反应引物，其引物序列如下：5'‑AGTGGCAGTGAAGCTAGAATC‑3'；5'‑CGCCCAATACCCATTAGGAAGT‑3'；(10)检测CSNK1A2基因的的PCR反应引物，其引物序列如下：5'‑CGAGTTGCTTCCCGATACTT‑3'；5'‑ACTTGCCAGCATACAACCCA‑3'；(11)检测CTBP1基因的的PCR反应引物，其引物序列如下：5'‑TCGGAACCCTTCAGCTTTAG‑3'；5'‑CTCGCTGTACCATGCAGC‑3'；(12)检测CTNNB1基因的PCR反应引物，其引物序列如下：5'‑ATGTCCAGCGTTTGGCTGA‑3'；5'‑TGGTCCTCGTCATTTAGCAGT‑3'；(13)检测CTNNBIP1基因的PCR反应引物，其引物序列如下：5'‑CCTATGCAGGGGTGGTCAA‑3'；5'‑CGACCTGGAAAACGCCATC‑3'；(14)检测CXXC4基因的PCR反应引物，其引物序列如下：5'‑CCCGCAGAATCATTCCTCCT‑3'；5'‑CCACAGTTGATGAGCCTCTT‑3'；(15)检测DAAM1基因的PCR反应引物，其引物序列如下：5'‑AGTATGCCAGCGAAAGGAC‑3'；5'‑TTCATCTCGATACCGCCCAG‑3'；(16)检测DAB2基因的PCR反应引物，其引物序列如下：5'‑TTCATTGCCCGTGATGTGAC‑3'；5'‑CCTGTTGCCCGGTTTTTATG‑3'；(17)检测DIXDC1基因的PCR反应引物，其引物序列如下：5'‑CTTACAGGGGATAAAGGATGCC‑3'；5'‑CCATATTTGCCCTCAGTAGCT‑3'；(18)检测DKK1基因的PCR反应引物，其引物序列如下：5'‑ATAGCACCTTGGATGGGTATTC‑3'；5'‑CTGATGACCGGAGACAAACA‑3'；(19)检测DKK3基因的PCR反应引物，其引物序列如下：5'‑ATGTGTGCAAGCCGACCT‑3'；5'‑CCTCAGCGCCATCTCTTC‑3'；(20)检测DVL1基因的PCR反应引物，其引物序列如下：5'‑GCGGGAGATCGTTTCCCA‑3'；5'‑CGGCGCTCATGTCACTCT‑3'；(21)检测DVL2基因的PCR反应引物，其引物序列如下：5'‑TCCGACACACCGTCAACAA‑3'；5'‑GCCATCGTTGTCATTGAGAG‑3'；(22)检测EP300基因的PCR反应引物，其引物序列如下：5'‑TTCCCCTAACCTCAATATGGGA‑3'；5'‑GCCTGTGTCATTGGGCTTTT‑3'；(23)检测FBXW11基因的PCR反应引物，其引物序列如下：5'‑CGGTGTGGACGACACAACT‑3'；5'‑ACAATGACACGCTCATCATACT‑3'；(24)检测FBXW4基因的PCR反应引物，其引物序列如下：5'‑GTCATGTATGAGTCCCCTTTCA‑3'；5'‑ACAACACCGTAGTAGGAGGAA‑3'；(25)检测FGF4基因的PCR反应引物，其引物序列如下：5'‑CTCGCCCTTCTTCACCGAT‑3'；5'‑GTAGGACTCGTAGGCGTTGT‑3'；(26)检测FOSL1基因的PCR反应引物，其引物序列如下：5'‑CAGGCGGAGACTGACAAACT‑3'；5'‑TCCTTCCGGGATTTTGCAGA‑3'；(27)检测FOXN1基因的PCR反应引物，其引物序列如下：5'‑CCTTCGAGGAGATCCCAGT‑3'；5'‑TAGGGGAGCCCGTTACAC‑3'；(28)检测FRAT1基因的PCR反应引物，其引物序列如下：5'‑TGCAGCAGCTAGTGCTCT‑3'；5'‑TAGCTGCCAGGCACAAGAA‑3'；(29)检测FRZB基因的PCR反应引物，其引物序列如下：5'‑TCCCGAGGCCATCGTTAC‑3'；5'‑CATTTACAGCGTTCACTGCTT‑3'；(30)检测FZD1基因的PCR反应引物，其引物序列如下：5'‑ATCTTCTTGTCCGGCTGTTAC‑3'；5'‑GTCCTCGGCGAACTTGTCAT‑3'；(31)检测FZD2基因的PCR反应引物，其引物序列如下：5'‑GTGCCATCCTATCTCAGCTAC‑3'；5'‑CTGCATGTCTACCAAGTACGT‑3'；(32)检测FZD3基因的PCR反应引物，其引物序列如下：5'‑GGATTGTTCTCGGGATTTCC‑3'；5'‑AGTGTGACACGTCCATATTCC‑3'；(33)检测FZD4基因的PCR反应引物，其引物序列如下：5'‑GTCTTTCAGTCAAGAGACGCT‑3'；5'‑GTTGTGGTCGTTCTGTGGT‑3'；(34)检测FZD5基因的PCR反应引物，其引物序列如下：5'‑CCGTTCGTGTGCAAGTGT‑3'；5'‑GAAGCGTTCCATGTCGATGA‑3'；(35)检测FZD6基因的PCR反应引物，其引物序列如下：5'‑GTGCAACTCTGTTCACATTCC‑3'；5'‑GCTATCGCCTAGCAAAAATCC‑3'；(36)检测FZD7基因的PCR反应引物，其引物序列如下：5'‑GTGCCAACGGCCTGATGT‑3'；5'‑AGGTGAGAACGGTAAAGAGC‑3'；(37)检测FZD8基因的PCR反应引物，其引物序列如下：5'‑ATCTTGTCGCTCACATGGTT‑3'；5'‑CATGGTGCCGATGAAGAGGT‑3'；(38)检测FZD9基因的PCR反应引物，其引物序列如下：5'‑CATGTGCTACAACGTCTACTC‑3'；5'‑GTGGCCCCATTTCTTCCC‑3'；(39)检测GSK3A基因的PCR反应引物，其引物序列如下：5'‑GTGCCCGAGACAGTGTAC‑3'；5'‑ACACCTTGACATAGAGGATAGG‑3'；(40)检测GSK3B基因的PCR反应引物，其引物序列如下：5'‑GGCAGCATGAAAGTTAGCAG‑3'；5'‑GGCGACCAGTTCTCCTGAAT‑3'；(41)检测JUN基因的PCR反应引物，其引物序列如下：5'‑TCCAAGTGCCGAAAAAGGAA‑3'；5'‑CGAGTTCTGAGCTTTCAAGG‑3'；(42)检测KREMEN1基因的PCR反应引物，其引物序列如下：5'‑ACTGTGAGATACCTGCTTGC‑3'；5'‑GTTGGACGTTTTACTGGTGC‑3'；(43)检测LEF1基因的PCR反应引物，其引物序列如下：5'‑ATGTCAACTCCAAACAAGGC‑3'；5'‑CCCGGAGACAAGGGATAAAAAG‑3'；(44)检测LRP5基因的PCR反应引物，其引物序列如下：5'‑TGGCCCGAAACCTCTACT‑3'；5'‑GCACACTCGATTTTAGGGTTC‑3'；(45)检测LRP6基因的PCR反应引物，其引物序列如下：5'‑TGTCAGCGAAGAAGCCATTAA‑3'；5'‑TCTAAGGCAATAGCTCTGGG‑3'；(46)检测MAPK8基因的PCR反应引物，其引物序列如下：5'‑TCTGGTATGATCCTTCTGAAGC‑3'；5'‑TCCTCCAAGTCCATAACTTCCT‑3'；(47)检测MMP7基因的PCR反应引物，其引物序列如下：5'‑GAGTGAGCTACAGTGGGAAC‑3'；5'‑CTATGACGCGGGAGTTTAACA‑3'；(48)检测MYC基因的PCR反应引物，其引物序列如下：5'‑GTCAAGAGGCGAACACACAA‑3'；5'‑TTGGACGGACAGGATGTATG‑3'；(49)检测NFATC1基因的PCR反应引物，其引物序列如下：5'‑GCAGAGCACGGACAGCTAT‑3'；5'‑GGGCTTTCTCCACGAAAATG‑3'；(50)检测NKD1基因的PCR反应引物，其引物序列如下：5'‑GATGCTGCGGGTAAAGCTC‑3'；5'‑TCTCATCTACGCAATGGTGGT‑3'；(51)检测NLK基因的PCR反应引物，其引物序列如下：5'‑CCAACCTCCACACATTGACTAT‑3'；5'‑ACTTTGACATGATCTGAGCTGA‑3'；(52)检测PITX2基因的PCR反应引物，其引物序列如下：5'‑GCCAAGGGCCTTACATCC‑3'；5'‑GGTGGGGAAAACATGCTCT‑3'；(53)检测PORCN基因的PCR反应引物，其引物序列如下：5'‑CGAGGGGCACAGATGATTG‑3'；5'‑AAGTAGAGGTAGCCCATGAAC‑3'；(54)检测PPARD基因的PCR反应引物，其引物序列如下：5'‑GCCTCTATCGTCAACAAGGA‑3'；5'‑GCAATGAATAGGGCCAGGT‑3'；(55)检测PRICKLE1基因的PCR反应引物，其引物序列如下：5'‑GCTGCCTTGAGTGTGAAAC‑3'；5'‑TGCCCGTCATAGGTCATCTG‑3'；(56)检测PYGO1基因的PCR反应引物，其引物序列如下：5'‑ATCTTGGCCCTGGTTATCCT‑3'；5'‑CTGAGTGAGTAAGGACCACAG‑3'；(57)检测RHOA基因的PCR反应引物，其引物序列如下：5'‑GATTGGCGCTTTTGGGTACA‑3'；5'‑AGCAGCTCTCGTAGCCATTT‑3'；(58)检测RHOU基因的PCR反应引物，其引物序列如下：5'‑TCGTCGCTGGCATTCAATAC‑3'；5'‑CCAGGACTTGGAGAGGTTTTT‑3'；(59)检测RUVBL1基因的PCR反应引物，其引物序列如下：5'‑AAAGAGCGAGTAGAAGCTGG‑3'；5'‑CCAAGTCATGCAAGGTCACAT‑3'；(60)检测SFRP1基因的PCR反应引物，其引物序列如下：5'‑ACGTGGGCTACAAGAAGATG‑3'；5'‑CAGCGACACGGGTAGATG‑3'；(61)检测SFRP4基因的PCR反应引物，其引物序列如下：5'‑CACACCAGACATGATGGTACA‑3'；5'‑GCTGAGATACGTTGCCAAAGT‑3'；(62)检测SOX17基因的PCR反应引物，其引物序列如下：5'‑CTCCGGTGTGAATCTCCC‑3'；5'‑CACGTCAGGATAGTTGCAGTAA‑3'；(63)检测TCF7基因的PCR反应引物，其引物序列如下：5'‑TGCACATGCAGCTATACCCA‑3'；5'‑TGGTGGATTCTTGGTGCTTTT‑3'；(64)检测TCF7L1基因的PCR反应引物，其引物序列如下：5'‑CTCTCCAACGGACCCCTG‑3'；5'‑TGACCTCGTGTCCTTGACTG‑3'；(65)检测TLE1基因的PCR反应引物，其引物序列如下：5'‑GAGTCCCTGGACCGGATTAA‑3'；5'‑AATACATCACATAGTGCCTCTG‑3'；(66)检测VANGL2基因的PCR反应引物，其引物序列如下：5'‑TGCGAGGGCCTCTTCATC‑3'；5'‑CAGCACCATAAGCAGGGC‑3'；(67)检测WIF1基因的PCR反应引物，其引物序列如下：5'‑GCCCACAACCCTGTCGAAA‑3'；5'‑CTCCCTGGTAACCTTTGGAA‑3'；(68)检测WISP1基因的PCR反应引物，其引物序列如下：5'‑TGCTGTAAGATGTGCGCTCA‑3'；5'‑ACACTCCTATTGCGTACCTC‑3'；(69)检测WNT1基因的PCR反应引物，其引物序列如下：5'‑AGGTTCCATCGAATCCTGCA‑3'；5'‑CATCTCGGAGAATACGGTCG‑3'；(70)检测WNT10A基因的PCR反应引物，其引物序列如下：5'‑GGAGACTCGCAACAAGATCC‑3'；5'‑CGATGGCGTAGGCAAAAG‑3'；(71)检测WNT11基因的PCR反应引物，其引物序列如下：5'‑GGAGTCGGCCTTCGTGTAT‑3'；5'‑GCTGAGGTTGTCCGCACA‑3'；(72)检测WNT16基因的PCR反应引物，其引物序列如下：5'‑GCAGAGAATGCAACCGTACA‑3'；5'‑CACATGGGTGTTGTAACCTC‑3'；(73)检测WNT2基因的PCR反应引物，其引物序列如下：5'‑GCCTTTGTTTATGCCATCTCC‑3'；5'‑CTTGGCGCTTCCCATCTTCT‑3'；(74)检测WNT2B基因的PCR反应引物，其引物序列如下：5'‑CGGGACCACACCGTCTTT‑3'；5'‑GCGAGTAATAGCGTGGACTA‑3'；(75)检测WNT3基因的PCR反应引物，其引物序列如下：5'‑GGAGAGGGACCTGGTCTACT‑3'；5'‑CTTGTGCCAAAGGAACCCG‑3'；(76)检测WNT3A基因的PCR反应引物，其引物序列如下：5'‑AGCTACCCGATCTGGTGGT‑3'；5'‑CAAACTCGATGTCCTCGCTA‑3'；(77)检测WNT4基因的PCR反应引物，其引物序列如下：5'‑GTACGCCATCTCTTCGGCA‑3'；5'‑GCGATGTTGTCAGAGCATCC‑3'；(78)检测WNT5A基因的PCR反应引物，其引物序列如下：5'‑TCGACTATGGCTACCGCTTT‑3'；5'‑CACTCTCGTAGGAGCCCTT‑3'；(79)检测WNT5B基因的PCR反应引物，其引物序列如下：5'‑CGCTTCGCCAAGGAGTTT‑3'；5'‑TGCCATCTTATACACAGCCC‑3'；(80)检测WNT6基因的PCR反应引物，其引物序列如下：5'‑GGTGCGAGAGTGCCAGTT‑3'；5'‑CGTCTCCCGAATGTCCTGT‑3'；(81)检测WNT7A基因的PCR反应引物，其引物序列如下：5'‑CTGTGGCTGCGACAAAGAGA‑3'；5'‑GCCGTGGCACTTACATTC‑3'；(82)检测WNT7B基因的PCR反应引物，其引物序列如下：5'‑CGCAGCTATCAGAAGCCCA‑3'；5'‑CAGGTGTTGCACTTGACG‑3'；(83)检测WNT8A基因的PCR反应引物，其引物序列如下：5'‑CAGAGGCGGAACTGATCTTT‑3'；5'‑CACCTGGATGTGTTGTGG‑3'；(84)检测WNT9A基因的PCR反应引物，其引物序列如下：5'‑CCACCGTGAGAAGAACTG‑3'；5'‑GCCTGCACTCCACATAGC‑3'；所述试剂还含有内参调控基因ACTB、B2M、HPRT1和RPLP0的PCR反应引物；检测ACTB基因的PCR反应引物，其引物序列如下：5'‑CATGTACGTTGCTATCCAGG‑3'；5'‑CTCCTTAATGTCACGCACGA‑3'；检测B2M基因的PCR反应引物，其引物序列如下：5'‑GAGGCTATCCAGCGTACTCC‑3'；5'‑CGGCAGGCATACTCATCTTT‑3'；检测HPRT1基因的PCR反应引物，其引物序列如下：5'‑GAAAAGGACCCCACGAAGTG‑3'；5'‑AGTCAAGGGCATATCCTACAAC‑3'；检测RPLP0基因的PCR反应引物，其引物序列如下：5'‑CAGATTGGCTACCCAACTGT‑3'；5'‑GGAAGGTGTAATCCGTCTCCA‑3'。