高纯度替考拉宁精粉的纯化方法

摘要

本发明提供了一种高纯度替考拉宁精粉的纯化方法，将替考拉宁发酵液碱性条件下离心除去发酵液中固体，滤液调至中性经大孔吸附树脂吸附洗脱后，得到65％以上的替考拉宁洗脱液，再经凝胶层析过滤，得到80％的替考拉宁洗脱液；最后将洗脱液浓缩，加入丙酮使其沉淀，离心得乳白色替考拉宁粗品；将粗品用适量水溶解，加样至装有反相硅胶的层析柱，使用乙腈与水的混合液进行梯度洗脱，得到高纯度的替考拉宁洗脱液，加入活性炭脱色，过滤，冷却沉淀除去剩余杂质，清液加丙酮使其完全沉淀，沉淀所得的湿品经红外干燥得到替考拉宁纯品。本发明工艺简单，质量可靠，替考拉宁精粉纯度高，单组分的含量可控，适于工业化规模生产高纯度的替考拉宁。

主权项

一种高纯度替考拉宁精粉的纯化方法，其特征在于：包括以下步骤：(1)将替考拉宁发酵液离心除去发酵液中的固体，得到含替考拉宁的滤液；(2)将所述滤液进行大孔吸附树脂柱层析，先采用纯水以10L/h的流速洗脱，再用体积比10:90，15:85，20:80，25:75，70:30的丙酮‑水溶剂系统以12L/h的流速进行梯度洗脱，收集以70％丙酮水溶液为洗脱剂的洗脱液，并浓缩，得到浓缩物；(3)将所述浓缩物经过凝胶层析柱过滤，先用体积比10:90或15:85的甲醇‑水洗脱；再用体积比35:65或40:60的甲醇‑0.5％NaHCO₃水溶液进行洗脱；收集以35:65或40:60的甲醇‑0.5％NaHCO₃水溶液为洗脱剂的洗脱液，浓缩以获得浓缩液；(4)往浓缩液中加入丙酮沉淀30min，得替考拉宁粗品；用水溶解替考拉宁粗品，并加样至反相硅胶层析柱进行层析，先用15％乙腈水溶液洗脱2h，再用30％乙腈水溶液洗脱1.5h，最后用46％乙腈水溶液洗脱，分段收集，通过HPLC检测各段洗脱液中替考拉宁各组分的纯度，将满足纯度要求的洗脱液合并；(5)往洗脱液中加入1.5～2.5％(w/v)的活性炭脱色20min，过滤，冷却沉淀除去杂质，加入6倍于上清液体积的丙酮于上清液中沉淀，低温结晶得晶体，晶体经红外干燥，得到替考拉宁纯品。