一种分阶段补料法培养小球藻的方法

摘要

本发明公开了一种分阶段补料法培养小球藻的方法，其主要特征是：小球藻的培养分为两个阶段，即小球藻无光照异养自发酵培养和小球藻后期光照培养，其中，在第二阶段培养过程中，补充营养因子：葡萄糖5.0 g·L^-1、Fe₂(SO₄)₃ 0.5～1.0g·L^-1、Na₂MoO₄·2H₂O 2.4mg·L^-1、CoCO₃  1.5mg·L^-1。采用本发明技术方案，既有效提供小球藻细胞所需养分，又避免一次性投料造成的浪费，同时，也可以通过物料的更替和营养因子改变，提高产品的产率。

主权项

一种分阶段补料法培养小球藻的方法，其特征在于：包括以下步骤： 1)小球藻发酵培养用的培养基：以水为溶剂，CH₃COONa 0.15～0.2g·L^‑1、蛋白胨1.6g·L^‑1、酵母膏0.8g·L^‑1、KH₂PO₄0.1～1.0g·L^‑1、K₂HPO₄2.0～10.0g·L^‑1、NaCl 0.1～5.0g·L^‑1、CaCl₂1.0～2.0g·L^‑1、ZnCl₂1.0～5.0g·L^‑1、CuCl₂0.1～1.0g·L^‑1、MnCl₂·4H₂O 1.0～5.0g·L^‑1、Fe₂(SO₄)₃0.5～1.0g·L^‑1；将配制好的培养基溶液导入密闭反应器中，在120～130℃和0.1～0.2MPa条件下消毒灭菌10～20min，然后将其加入到养殖罐中，待冷却至25～30℃时，加NaOH溶液或稀盐酸调节pH为6～8，然后添加小球藻菌种，其投加量为小球藻接种密度为25％； 2)小球藻的无光照异养自发酵培养：将所述已接小球藻菌种的液体培养基在阻断光照条件下发酵培养，其中，菌种发酵培养过程中，养殖罐旋转转速为140～200r/min，养殖罐通入空气的量为0.5m³·min^‑1，同时，通过全自动流加入NH₄NO₃或CH₃CH₂ONa调节pH值维持在6～8之间，温度控制25～30℃，发酵培养时间为12h； 3)小球藻生长阶段培养用的培养基补料：以发酵培养用的培养基中的水量为标准，葡萄糖5.0g·L^‑1、Fe₂(SO₄)₃0.5～1.0g·L^‑1、Na₂MoO₄·2H₂O 2.4mg·L^‑1、CoCO₃1.5mg·L^‑1，加入补料时，提高养殖罐的旋转转速为500r/min，同时有效控制培养基pH值在6～8之间，温度控制25～30℃； 4)小球藻培养后期光照培养：所述的无光照发酵培养12h后，小球藻进入生长阶段，在该阶段，采用光源照射提供光照，其中，光照强度为4.5×10³lx，光照频率为220μmol·m^‑2·s^‑1，养殖罐旋转转速为140～200r/min，养殖罐通入空气的量为0.5m³·min^‑1，通过全自动流加入NH₄NO₃或CH₃CH₂ONa调节pH值维持在6～8之间，温度控制25～30℃，光照培养时间为12h。