一种尾巨桉DH32-28品种的组培快繁方法

摘要

本发明公开了一种尾巨桉DH32-28品种的组培快繁方法，通过外植体的建立、外植体消毒、初代培养、继代培养、生根培养、炼苗和移栽等步骤实现，针对初代培养、继代和生根培养选择了专用的培养基组成，合理的炼苗措施使尾巨桉移栽后生长快，成活率高，达到了繁殖系数高，繁殖效果好的目的。同时本发明方法生产成本低廉，得到的组培苗遗传状一致，是桉树组培快繁的有效途径，且适用范围广。

主权项

一种尾巨桉DH32‑28品种的组培快繁方法，其特征在于：包括以下步骤：①外植体的建立：选择4‑5年树龄，生长健壮、树干粗大、无病虫害的优树，从离地面20‑25cm处伐倒，待树桩萌芽长至10cm、半木质化、芽眼还未萌动时，将芽条采回作为外植体材料；为减少材料污染源，采取芽条时，应选择连续三天以上晴好天气后进行；将采回的芽条去除大部分叶片后，用自来水冲洗15min，0.5%洗衣粉溶液浸泡15min，再用自来水冲洗干净；②外植体消毒：步骤①得到的外植体用75％的酒精浸泡30S，无菌水冲洗4‑5次，沥干水，然后置于0.1％的升汞溶液中消毒9min，无菌水冲洗4‑5 次，切取萌芽条顶芽下来第二节起1‑2节的带芽茎段，长1‑2cm；③初代培养：将步骤②处理过的茎段在无菌条件下接种到初代培养基，初代培养基成分为：MS+ NAA0.5mg/L+6‑BA 1.2mg/L+2g/L PVP+ 3％糖蜜，培养基pH 5.9；光照强度1000Lux，培养温度25±2℃，培养时间35±2天；④继代培养：初代培养至节处长出丛芽，取丛芽进行继代培养，继代培养基成分为：MS+6‑BA 0.35mg/L+IAA0.15mg/L+0.12%氨基寡糖素+3％糖蜜；培养温度25±2℃，光照时间16h/d，培养基pH 5.8‑6.0；培养20天，形成2cm长的具有3个茎节的芽条，将其切成带茎节的切段，每个芽分割成2段；每20天如此继代一次，扩繁试管苗；⑤生根培养：步骤④扩繁的试管苗取出，转入生根培养，生根培养基成分为：1/4MS+IBA 0.6mg/L+ABT 0.3mg/L+0.8%氨基寡糖素+15%糖蜜；光照强度为3000Lux，培养温度25±2℃，培养至25 天，根长至1‑3cm，苗长高3cm时出瓶；⑥炼苗：选择健壮、半木质化的试管苗出瓶移栽在泥炭土：椰糠配比为1:3 的营养基质中，保持空气湿度85‑90%，光照10000lux；⑦移栽：炼苗15天后移到露天培养，当育苗盘中苗木高度为15‑20cm时，移栽造林。