第四代HIV抗体抗原检测试纸

摘要

本发明提供一种第四代HIV抗体抗原检测试纸及其制备方法和应用，包括：吸水滤纸、硝酸纤维素膜、胶体金垫、样品垫和反应支持物；在所述反应支持物外表面上依次相互搭接粘帖所述样品垫、所述胶体金垫、所述硝酸纤维素膜和所述吸水滤纸。因此，本发明所提供的第四代HIV抗体抗原检测试纸具有使用方便、操作简单、便于推广、能够在一个检测试纸上同时区分P24抗原阳性结果和HIV抗体阳性结果的优点。

主权项

一种第四代HIV抗体抗原检测试纸，其特征在于，包括：吸水滤纸、硝酸纤维素膜、胶体金垫、样品垫和反应支持物；在所述反应支持物外表面上依次相互搭接粘帖所述样品垫、所述胶体金垫、所述硝酸纤维素膜和所述吸水滤纸；并且，所述硝酸纤维素膜上自靠近所述样品垫一侧依次设置有第一条带T1、第二条带T2和质控条带C；所述第一条带T1包被P24抗原单克隆抗体，所述第二条带T2包被GP36、GP41和GP120抗原，所述质控条带C包被羊抗鼠IgG多克隆抗体；所述胶体金垫含有胶体金标记的P24抗原单克隆抗体和胶体金标记的GP36、GP41、GP120抗原混合标记物；其中，所述的第四代HIV抗体抗原检测试纸按以下方法制备：(1)分别制备纯度和浓度均符合要求的P24抗原单克隆抗体、GP36抗原、GP41抗原和GP120抗原；(2)硝酸纤维素膜的制备：将步骤(1)制得的P24抗原单克隆抗体用0.02mol/L pH＝7.2的PBS稀释成1.0mg/ml，用喷膜机以1.0μl/cm的速度喷于硝酸纤维素膜上，形成第一条带T1；将步骤(1)制得的GP36抗原、GP41抗原和GP120抗原分别用0.02mol/L pH＝7.2的PBS稀释成0.3mg/ml、0.6mg/ml和0.4mg/ml，用喷膜机以1.0μl/cm的速度喷于硝酸纤维素膜上，形成第二条带T2；将羊抗鼠IgG多克隆抗体用0.02mol/L pH＝7.2的PBS稀释成1.0mg/ml，用喷膜机以1.0μl/cm的速度喷于硝酸纤维素膜上，形成质控条带C；(3)胶体金垫的制备：采用最佳标记pH值为7.4至8.0、最佳标记浓度为15至18μg/ml的标记条件制得胶体金标记的P24抗原单克隆抗体；分别采用最佳标记pH值为7.4至8.0、最佳标记浓度为10至12μg/ml的标记条件制得胶体金标记的GP36、GP41和GP120抗原；将本步骤上述得到的胶体金标记的P24抗原单克隆抗体、胶体金标记的GP36、GP41和GP120抗原进行纯化后，喷涂到胶体金垫上，干燥备用；(4)第四代HIV抗体抗原检测试纸的制备：在所述反应支持物外表面上依次相互搭接粘贴所述样品垫、所述胶体金垫、所述硝酸纤维素膜和所述吸水滤纸；其中，所述制备纯度和浓度均符合要求的P24抗原单克隆抗体的制备方法为：采用动物体内生产单抗的方法获得P24抗原单克隆抗体腹水，将获得的P24抗原单克隆抗体腹水使用辛酸‑饱和硫酸铵沉淀，得到蛋白浓度高于2.0mg/ml、纯度大于90％的P24抗原单克隆抗体；其中，所述GP36抗原、GP41抗原或GP120抗原的制备方法为：将含有GP36、GP41或GP120抗原的细菌培养液用辛酸‑饱和硫酸铵沉淀后，再用离子层析柱层析纯化，得到浓度高于2.0mg/ml，纯度大于90％的GP36、GP41或GP120抗原。