一种乳制品中酪蛋白磷酸肽含量的检测方法

摘要

本发明提供了一种乳制品中酪蛋白磷酸肽含量的检测方法，该方法主要包括以下步骤：采用BaCl₂-乙醇法对酪蛋白磷酸肽原料进行纯化；采用高效液相色谱法对纯化后的酪蛋白磷酸肽原料进行标准曲线的绘制；采用固相萃取对乳制品样品进行纯化后，用高效液相色谱法对其进行检测，得到检测结果。本发明的检测方法简化了操作步骤，缩短了检测时间，尤其可以对低酪蛋白磷酸肽含量的乳制品进行更有效、更精准的检测。

主权项

一种乳制品中酪蛋白磷酸肽含量的检测方法，其包括以下步骤：A、酪蛋白磷酸肽原料的纯化将酪蛋白磷酸肽原料溶解后，调整pH值为4.6，定容为0.2g/mL的酪蛋白磷酸肽原料溶液，静置30min；将上述溶液在4℃、5000rpm离心15min，取上清液，加入BaCl₂使其浓度为0.05M，混匀后，得到一含有BaCl₂的酪蛋白磷酸肽原料溶液；以上述含有BaCl₂的酪蛋白磷酸肽原料溶液：无水乙醇＝1:2的体积比，在上述含有BaCl₂的酪蛋白磷酸肽原料溶液中加入无水乙醇，混匀后，在4℃静置12‑16小时；将上述静置后的溶液在4℃、5000rpm离心15min，弃去上清液，以上述含有BaCl₂的酪蛋白磷酸肽原料溶液：H₂SO₄＝1:0.4的体积比，在沉淀中加入浓度为0.125M的H₂SO₄，然后用滤纸过滤；取滤液在60‑70℃烘干60min，之后在105℃烘干至恒重，得到纯化的酪蛋白磷酸肽原料；B、标准曲线的绘制将上述纯化的酪蛋白磷酸肽原料用超纯水制备浓度为0.1mg/100mL、0.5mg/100mL、1mg/100mL、5mg/100mL、10mg/100mL、20mg/100mL的系列标准工作液，采用高效液相色谱仪对该系列标准工作液进行检测分析，绘制标准曲线；C、酪蛋白磷酸肽成品的检测a、样品纯化a1、提取当样品为液态乳制品时：称取20g样品，用浓度为1％的三氯乙酸定容至50mL，超声10min，静置过滤得待净化液；当样品为固态乳制品时：称取5g样品，用浓度为1％的三氯乙酸溶解后定容至50mL，超声10min，静置过滤得待净化液；a2、净化将固相萃取柱依次用3mL甲醇、3mL水活化，取适当体积的待净化液转移至固相萃取小柱中，依次用3mL水和3mL甲醇洗涤，弃去淋洗液后用6mL氨化甲醇洗脱至10mL具塞试管中，整个固相萃取过程流速不超过1mL/min，将洗脱液于50℃下用氮气吹干，得到残留物；b、检测及计算将吹干后得到的残留物用适当体积流动相A定容，所采用的流动相A为色谱纯乙腈，过微孔滤膜后，将得到的上清液采用高效液相色谱仪进行检测，根据标准曲线及样品的峰面积计算出成品中的酪蛋白磷酸肽含量。