一种牦牛胃溶菌酶的分离方法

摘要

本发明公开了一种牦牛胃溶菌酶的分离纯化方法，包括如下步骤：(1)匀浆，得匀浆液(2)粗纯，得粗纯液；(3)CM-Sepharose FF柱层析，得层析液；(4)Sephadex G-75柱层析，得牦牛胃溶菌酶溶液；(5)冻干，即得牦牛胃溶菌酶。采用本发明方法可以从牦牛胃黏膜组织中分离得到纯品牦牛皱胃溶菌酶，其酶活高，应用范围广，还具有抑菌作用，可以作为抗菌药物使用。同时，本发明方法得率高，操作简便，具有工业应用价值。

主权项

一种牦牛胃溶菌酶的分离纯化方法，其特征在于：包括如下步骤：(1)匀浆：取牦牛皱胃粘膜组织，捣碎，加入醋酸铵溶液，醋酸铵溶液的加入量为粘膜组织的2倍(v/w)，匀浆，离心，分离上清液和沉淀，再在沉淀中再加入醋酸铵溶液，醋酸铵溶液的加入量为沉淀量的2倍(v/w)，离心，合并上清液，即为匀浆液；其中，醋酸铵溶液的浓度为10mM；(2)粗纯：调节匀浆液的pH至4，离心，取上清液，在沸水浴中加热2min，待温度降至室温，再调pH至5，离心，得上清，即为粗纯液；(3)CM‑Sepharose FF柱层析：采用浓度为10mM的醋酸铵溶液平衡CM‑Sepharose FF柱，取步骤(2)的粗纯液上样，用浓度为10mM的醋酸铵洗脱杂蛋白，再用浓度为10mM～300mM的醋酸铵溶液线性梯度洗脱，根据洗脱图谱，收集第二个峰对应的溶液，即为层析液；(4)Sephadex G‑75柱层析：采用浓度为0.2％(v/v)醋酸溶液平衡Sephadex G‑75柱，取步骤(3)的层析液上样，用浓度为0.2％(v/v)的醋酸溶液洗脱，根据洗脱图谱，收集最后一个峰对应的溶液，即得牦牛胃溶菌酶溶液；(5)冻干，即得牦牛胃溶菌酶。