主权项 |
一种鸡肠道上皮γδT细胞的分离培养方法,其特征在于该方法包括以下步骤:步骤1:由经过禁食采用静脉放血处死的试验鸡,无菌手术取2~3cm肠段置于含1%双抗的PBS中;步骤2:制备肠壁组织浆液经离心去上清液后,于沉淀中加入0.05%胶原酶混合酶进行消化;步骤3:向细胞液加入无血清RPMI‑1640培养液终止消化,离心;去上清,无血清培养液重悬细胞,离心洗涤细胞;再次重悬细胞,分别经过不同目数自制细胞筛过滤细胞,离心去上清;步骤4:将细胞重悬于密度为1.058g/mL淋巴细胞分离液中;于离心管底部加入4mL密度为1.098g/mL淋巴细胞分离液;将细胞悬液铺于之上,离心;取两个不同密度的淋巴细胞分离液界面黄白色细胞层;步骤5:在浓度为1×10<sup>7</sup>/mL细胞悬液中,先后加入一定量的TCR1抗体和磁珠,进行磁珠二抗分选,并用PBS适当重悬稀释,保证二者与目标细胞结合;将细胞悬液置于细胞分选仪进样口,得到阳性细胞;步骤6:将细胞悬浮于10%胎牛血清RPMI‑1640培养液,台盼蓝染色,计数活细胞数,调整细胞浓度为1×10<sup>7</sup>/mL,于二氧化碳培养箱培养48h后,测定其细胞存活情况。 |