人脂肪间充质干细胞制备方法及其在制备疾病药物的应用

摘要

本发明公开了一种人脂肪间充质干细胞制备方法及其在制备疾病药物的应用，人脂肪间充质干细胞的制备方法包括如下步骤：脂肪的采集、脂肪的运输、脂肪的交接、制备脂肪微块、SVF提取、原代培养、传代培养、细胞冻存及建立细胞库、细胞复苏。人脂肪间充质干细胞具有强大的免疫调节作用，能应用在制备治疗自身免疫性疾病药物中，与常规药物相比具有如下有点：1、治疗方便，疗效持久。能帮助患者减少药物治疗的种类和数量以及药物治疗带来的毒副作用，甚至停用免疫抑制剂等药物治疗，降低死亡率和致残率，改善生活质量；2、安全性好，无毒副反应；3、脂肪组织来源广泛，采集方便，且脂肪MSCs的基础研究扎实，制备技术成熟，可推广程度高，技术可控；4、人脂肪MSCs制备成本相对其他生物制剂费用低，多数患者能够接受。

主权项

一种人脂肪间充质干细胞的制备方法，其特征在于：它包括如下具体步骤：(1)脂肪的采集：经供体筛选合格后吸脂或手术切除方式无菌采集脂肪标本10ml以上；(2)脂肪的运输：将脂肪置于保存液中，2‑8℃恒温保存于疫苗箱中，48h内送至实验室；(3)脂肪的交接：实验室接收脂肪，登记好客户信息，并进行编码；(4)制备脂肪微块：洗涤脂肪，去除残留的血液，将脂肪绞碎为0.5‑1mm3的脂肪微块；(5)SVF提取：0.1％胶原酶I消化脂肪微块，离心弃去上层，100um滤网过滤，获得SVF；(6)原代培养：按照1×105个/ml接种，置于(37±0.5)℃，(5±0.2)％浓度C02条件，培养基为人间充质干细胞无血清完全培养基；(7)传代培养：原代培养经7d左右，细胞融合达70％～80％时，胰酶消化收集P0代细胞，按照5000～6000个/cm2的密度传P1，经3d，P1代融合达80％～90％时，同上，传P2，以此类推传至P3、P4......；(8)细胞冻存及建立细胞库：将上述获得的每批次人脂肪间充质干细胞进行无菌、支原体、内毒素、核型分析、流式表面标记等检测，检测合格的人脂肪间充质干细胞按照供体来源、细胞编码、细胞数量、细胞代数及冻存日期等进行保存，建立可供检索的细胞信息档案，建立细胞库；(9)细胞复苏：将人脂肪间充质干细胞冻存管从液氮罐中取出，迅速放入37℃水浴中，不断摇动，2min中之内解冻，离心洗涤弃上清，获得人脂肪间充质干细胞，按照需求使用即可。