主权项 |
一种获得牡丹单条染色体的方法,其特征在于,通过激光显微切割技术获得牡丹单条染色体,包括如下步骤:第一步,样品制备1)样品液制备:选取牡丹花蕾上的雄蕊并进行软化,切取花药,向花药上滴加20~30μl卡宝品红进行染色,并夹碎样品,去掉组织残渣,得到样品液;2)镜检:将样品液在普通光学显微镜10~30倍下进行初步观察,判断是否有10%以上的牡丹细胞处于减数分裂后期,如果有10%以上的牡丹细胞处于减数分裂后期,则继续下面实验;如果处于减数分裂后期的牡丹细胞数目小于10%,则重新选取雄蕊;3)转膜:将样品液从普通载玻片转移到覆膜载玻片上,保持覆膜完整;4)压片:用盖玻片盖在覆膜载玻片的样品液上,垂直敲打盖玻片,使染色体散开;压片、揭掉盖玻片、室温晾干覆膜载玻片;第二步,显微切割1)准备收集管:将PCR管固定在激光显微切割仪的收集管架上,向PCR管中加入3~6μl 1% TE溶液;2)上样:将上述晾干的覆膜载玻片倒置固定于激光显微切割仪的样品夹中;3)寻找目标染色体:在显微镜10~30倍镜下寻找目标染色体;4)选定目标染色体:切换显微镜40~63倍镜,调出清晰画面;5)调节激光参数:6)目标染色体划线:画出要切割的目标染色体区域;7)激光切割:自动或手动控制激光切下所选取的目标染色体,并收集至PCR管;小心取下PCR管,并盖严,对PCR管进行离心,使溶有染色体的溶液沉入管底,并于‑40℃~‑80℃保存,备用。 |