一种利用微生物发酵生产甘草次酸的方法

摘要

一种利用微生物发酵生产甘草次酸的方法，涉及一种生产甘草次酸的方法。是要解决现有生产甘草次酸的方法存在生产工艺复杂、费用高、环境污染的问题。方法：一、甘草内生真菌RP4菌株的活化；二、甘草内生真菌RP4种子液的制备；三、甘草内生真菌RP4发酵液供试品的制备；四、甘草内生真菌RP4发酵液中甘草次酸的提取分离。本发明方法工艺简单，成本低，使用生物发酵来生产，不污染环境。用于生产甘草次酸。

主权项

一种利用微生物发酵生产甘草次酸的方法，其特征在于该方法按以下步骤进行：一、甘草内生真菌RP4菌株的活化：将RP4菌株接种于马铃薯固体培养基平板上，放置于恒温箱中，培养3d，得到活化的RP4菌株；二、甘草内生真菌RP4种子液的制备：将活化后的RP4菌株在无菌条件下以接种环挑取菌丝接种于马铃薯液体培养基中培养，计数，以浓度为3×10⁸CFU/mL的菌液作为种子液；三、甘草内生真菌RP4发酵液供试品的制备：取种子液50μL，接种至300mL马铃薯液体培养基中培养，获得RP4菌株发酵样品，将RP4菌株发酵样品真空抽滤，得RP4菌株发酵液，将所得RP4菌株发酵液至于50℃减压浓缩至100mL作为供试品；四、甘草内生真菌RP4发酵液中甘草次酸的提取分离：将步骤三获得的供试品采用乙醚萃取3次，再采用乙酸乙酯萃取3次，合并乙酸乙酯萃取液，于50℃减压浓缩至100mL，放置于高速冷冻离心机中离心，弃去沉淀，将上层溶液挥去溶剂，加入2g柱层层析硅胶，搅拌均匀后挥干溶剂作为柱层析样品，采用湿法装柱，经过二次硅胶柱层析分离后得到甘草次酸。