一种猪Sox6蛋白的体外表达及其多克隆抗体的制备方法

摘要

本发明公开了一种猪Sox6蛋白的体外表达、多克隆抗体的制备的方法。该体外表达方法包括：设计引物PCR扩增猪Sox6基因；构建大肠杆菌重组表达载体pET-30a(+)-pSox6；将构建的且经DNA测序鉴定正确的重组表达载体pET-30a(+)-pSox6转化到大肠杆菌Rosetta(DE3)中；构建猪Sox6重组表达菌株；通过重组菌株诱导表达条件的优化最大限度的获得重组猪Sox6蛋白；镍柱亲和层析法纯化得到高纯度的重组猪Sox6蛋白。多克隆抗体的制备包括：以纯化的重组猪Sox6蛋白为抗原多次注射免疫大鼠获得猪Sox6多克隆抗体，采用ELISA法测定抗体效价和Western blot法鉴定抗体特异性。通过本发明方法，实现了猪Sox6蛋白的体外表达和制备出了抗体效价高、抗体特异性良好的猪Sox6多克隆抗体，完全可以满足相关实验的需要。

主权项

一种猪Sox6蛋白体外表达的方法，其特征在于，包括以下步骤：a.以含猪Sox6基因完整编码区的pMD19T‑pSox6质粒为模板PCR扩增猪Sox6基因；b.构建用于表达猪Sox6蛋白的大肠杆菌重组表达载体；c、利用步骤b所得的重组表达载体经化学法转化到大肠杆菌株Rosetta(DE3)中，构建重组表达菌株；d.培养步骤c所得重组表达菌株至OD₆₀₀达到0.4‑0.6，加入诱导剂IPTG，诱导表达猪Sox6蛋白；e.纯化诱导表达的猪Sox6蛋白。