6-氰基-（3R,5R）-二羟基己酸叔丁酯的生物制备方法

摘要

一种6-氰基-（3R,5R）-二羟基己酸叔丁酯的生物制备方法，其以6-氰基-（5R）-羟基-3-氧代己酸叔丁酯为底物，该底物在生物催化剂、辅因子和辅因子再生系统的存在下发生还原反应生成6-氰基-（3R,5R）-二羟基己酸叔丁酯，所述的还原反应在pH为6~8的水相缓冲液中进行。本发明通过对工艺条件的优化，主要是通过对还原反应的pH的优化，提高底物浓度，降低酶用量，从而降低了生产成本，实现了高效率的生物转化过程。

主权项

一种6‑氰基‑（3R,5R）‑二羟基己酸叔丁酯的生物制备方法，其以6‑氰基‑（5R）‑羟基‑3‑氧代己酸叔丁酯为底物，该底物在生物催化剂、辅因子和辅因子再生系统的存在下发生还原反应生成6‑氰基‑（3R,5R）‑二羟基己酸叔丁酯，其特征在于：所述的生物催化剂为酮还原酶，所述的酮还原酶为苏州汉酶生物技术有限公司生产的牌号为KRED101的酮还原酶，所述的辅因子再生系统包括葡萄糖和葡萄糖脱氢酶，所述的还原反应在pH为7.0的水相缓冲液中进行，所述的水相缓冲液为三乙醇胺盐酸缓冲溶液，在起始时的反应体系中，所述的底物6‑氰基‑（5R）‑羟基‑3‑氧代己酸叔丁酯的浓度为350~400 mg/mL，所述的酮还原酶与所述的底物6‑氰基‑（5R）‑羟基‑3‑氧代己酸叔丁酯的质量比为0.007:1，在起始时的反应体系中，所述的辅因子：所述的葡萄糖：所述的葡萄糖脱氢酶;所述的6‑氰基‑（5R）‑羟基‑3‑氧代己酸叔丁酯的质量比为0.0007：1.17：0.022：1；所述的制备方法的实施过程如下：在反应容器中依次加入葡萄糖、所述的水相缓冲液，搅拌均匀，继续加入底物6‑氰基‑（5R）‑羟基‑3‑氧代己酸叔丁酯，搅拌均匀，用氢氧化钠溶液调节pH7.0，再继续加入葡萄糖脱氢酶和酮还原酶，用氢氧化钠溶液调节pH7.0，再加入所述的辅因子，用氢氧化钠溶液维持pH7.0，搅拌反应，利用LC‑MS检测反应进程，待转化率达90~99%时，结束反应。