发明名称 |
用于核酸指数式扩增的切口和延长扩增反应 |
摘要 |
本发明提供一种扩增双链核酸靶序列的方法,其包含在基本等温的条件下:使包含具有有义链和反义链的双链靶序列的靶DNA分子与正向模板和反向模板接触,其中,i)所述正向模板所包含的核酸序列包含位于3’末端且与所述靶序列反义链的3’末端互补的识别区域、ii)所述反向模板所包含的核苷酸序列包含位于3’末端且与所述靶序列有义链的3'末端互补的识别区域、提供能在所述正向模板的所述切口位点上游、下游或所述切口位点处切口但不能在所述靶序列内切口的第一切口酶;提供能在所述反向模板的所述切口位点上游、下游或所述切口位点处切口但不能在所述靶序列内切口的第二切口酶;和提供DNA聚合酶;从而产生扩增产物。 |
申请公布号 |
CN104357546A |
申请公布日期 |
2015.02.18 |
申请号 |
CN201410465144.4 |
申请日期 |
2008.07.14 |
申请人 |
爱奥尼安技术公司 |
发明人 |
布莱恩·K·梅普尔斯;里贝卡·C·霍姆伯格;安德鲁·P·米勒;雅罗德·普罗文斯;理查德·罗思;杰弗里·曼代利 |
分类号 |
C12Q1/68(2006.01)I |
主分类号 |
C12Q1/68(2006.01)I |
代理机构 |
杭州金道专利代理有限公司 33246 |
代理人 |
黎双华 |
主权项 |
一种扩增双链核酸靶序列的方法,其包含在基本等温的条件下a)使包含具有有义链和反义链的双链靶序列的靶DNA分子与正向模板和反向模板接触,其中i)所述正向模板所包含的核酸序列包含位于3’末端且与所述靶序列反义链的3’末端互补的识别区域、所述识别区域上游的切口酶结合位点和切口位点、以及所述切口位点上游的稳定区域,其中所述核酸序列中与所述靶反义链的3’末端互补的部分长8至15个核苷酸;ii)所述反向模板所包含的核苷酸序列包含位于3’末端且与所述靶序列有义链的3'末端互补的识别区域、所述识别区域上游的切口酶结合位点和切口位点、以及所述切口位点上游的稳定区域,其中所述核酸序列中与所述靶反义链的3’末端互补的部分长8至15个核苷酸;b)提供能在所述正向模板的所述切口位点上游、下游或所述切口位点处切口但不能在所述靶序列内切口的第一切口酶;c)提供能在所述反向模板的所述切口位点上游、下游或所述切口位点处切口但不能在所述靶序列内切口的第二切口酶;和d)提供DNA聚合酶;其中扩增是通过多次如下循环来实施:所述聚合酶沿所述靶序列延长所述正向和反向模板,从而产生双链切口位点,并且所述切口酶在所述切口位点处或所述位点的扩增拷贝处切口,从而产生扩增产物。 |
地址 |
美国加利福尼亚州 |