制备小牛脾提取物的方法及在抗肿瘤和免疫调节中的应用

摘要

本发明提供了制备小牛脾提取物的方法及在抗肿瘤和免疫调节中的应用。所述小牛脾提取物的制备工艺为包括匀浆液的制备，利用复合酶的协同作用对匀浆液酶解、5'-磷酸二酯酶酶解和膜过滤，以及无菌过滤和灌装。本发明改进了小牛脾提取物的生产工艺，使提取物中多肽提取率提升到原工艺的2-4倍，核糖提取率提升到原工艺的1-3倍。其抗肿瘤活性和提高免疫力活力分别提升了30%和60%，并且该提取物制剂在体内外均可以抑制肿瘤的生长并且可以逆转放化疗引起的免疫抑制现象，该提取物还可以双向调节人体的免疫力，维持免疫系统的正常工作。因此，小牛脾提取物可用于制备抗肿瘤活性和免疫调节作用的药物或者与化疗药物联用组成组合制剂。

主权项

一种小牛脾提取物，是通过以下方法制备的：1）取乳牛的脾脏500g，用0.9％氯化钠溶液清洗并浸泡12小时以去除血水并漂洗；2）按照小牛脾重量加入1‑1.2倍量的生理盐水进行匀浆1～5次，胶体磨粒度为2～8μm；3）按照物料重量的0.7～2.0%加入组合蛋白酶,其中胰蛋白酶，菠萝蛋白和酶胃蛋白酶的质量比为2～2.5：1.5～2.5：0.5～2，搅拌均匀并将匀浆液取出放入50℃以下水浴中升温至30℃～40℃保温30分钟；4）按照物料重量的0.2～0.5%加入5’‑磷酸二酯酶，搅拌均匀并将匀浆液放入90℃以下水浴中升温至60℃～70℃保温120分钟；5）保温结束后迅速降温至10℃～20℃ ；6）将上述溶液离心，离心速度为3000‑4000转/分，温度 0～5℃以下，离心10‑20分钟，收集上清液；7）分别用100000～50000道尔顿/10000～9000道尔顿、8000～5000道尔顿的膜超滤；8）0.20μm滤芯无菌过滤分装，即得提取物；其中所述的组合蛋白酶为胰蛋白酶、菠萝蛋白酶和胃蛋白酶混合物，所述复合酶的质量比为：胰蛋白酶2～2.5份，菠萝蛋白酶1.5～2.5份，胃蛋白酶0.5～2份。