一种检测乙肝病毒核心基因启动子碱基突变的试剂盒及检测方法

摘要

本发明公开了一种检测乙肝病毒核心基因启动子碱基突变的试剂盒及检测方法，该试剂盒包括PCR反应液A、PCR反应液B和PCR反应液C，本发明方法所使用的引物，主要依靠乙肝病毒核心基因启动子目标基因及其碱基变异碱基设计引物，而且通过未突变(野生型)的反向互补序列引物,在PCR扩增时,对野生型碱基序列的竞争性抑制,而严重阻滞野生株DNA的扩增,准确检测基因变异。该试剂盒检测方便，结果稳定，成本低、敏感性高。

主权项

一种检测乙肝病毒核心基因启动子碱基突变的试剂盒，其特征在于该试剂盒包括以下成分：PCR试剂盒A组试剂：PCR反应液A:PCR缓冲液、TaqDNA聚合酶、dNTPHBV‑A1上游引物    5′‑gttta aagac tggga ggagt‑3′HBV‑D公用下游引物  5′‑agcca cccaa ggcac agctt g‑3′HBV‑Y荧光探针:5′‑FAM‑tgtag gcata aattg gtctg tt‑TAMARA‑3′；PCR试剂盒B组试剂：PCR反应液B:PCR缓冲液、TaqDNA聚合酶、dNTPHBV‑B1上游引物    5′‑tgggg gagga gatta ggtta at‑3′HBV‑B2上游反义引物  5′‑tttaa cctaa tctcc tcccc ca‑3′HBV‑D公用下游引物  5′‑agcca cccaa ggcac agctt g‑3′HBV‑Y荧光探针:5′‑FAM‑tgtag gcata aattg gtctg tt‑TAMARA‑3′；PCR试剂盒C组试剂：PCR反应液C:PCR缓冲液、TaqDNA聚合酶、dNTPHBV‑C1上游引物      5′‑ggagg agatt aggtt aaaga‑3′HBV‑C2上游反义引物  5′‑ccttt aacct aatct cctcc‑3′HBV‑D公用下游引物   5′‑agcca cccaa ggcac agctt g‑3′HBV‑Y荧光探针:5′‑FAM‑tgtag gcata aattg gtctg tt‑TAMARA‑3′；其中：PCR反应液A：1×PCR缓冲液、TaqDNA聚合酶1.5U、dNTP 0.3μmol/L；HBV‑A1上游引物     5′‑gttta aagac tggga ggagt‑3′0.3μmol/LHBV‑D公用下游引物  5′‑agcca cccaa ggcac agctt g‑3′0.3μmol/LHBV‑Y荧光探针:5′‑FAM‑tgtag gcata aattg gtctg tt‑TAMARA‑3′；0.2μmol/L；PCR反应液B：1×PCR缓冲液、TaqDNA聚合酶1.5U、dNTP 0.3μmol/LHBV‑B1上游引物  5′‑tgggg gagga gatta ggtta at‑3′0.3μmol/LHBV‑B2上游反义引物  5′‑tttaa cctaa tctcc tcccc ca‑3′0.03μmol/LHBV‑D公用下游引物  5′‑agcca cccaa ggcac agctt g‑3′0.3μmol/LHBV‑Y荧光探针:5′‑FAM‑tgtag gcata aattg gtctg tt‑TAMARA‑3′0.2μmol/L；PCR反应液C：1×PCR缓冲液、TaqDNA聚合酶1.5U、dNTP 0.3μmol/LHBV‑C1上游引物      5′‑ggagg agatt aggtt aaaga‑3′0.3μmol/LHBV‑C2上游反义引物  5′‑ccttt aacct aatct cctcc‑3′0.03μmol/LHBV‑D公用下游引物   5′‑agcca cccaa ggcac agctt g‑3′0.3μmol/LHBV‑Y荧光探针:5′‑FAM‑tgtag gcata aattg gtctg tt‑TAMARA‑3′0.2μmol/L。