miRNA检测方法及应用

摘要

本发明提供了一种miRNA检测方法及应用。具体地，本发明提供了一种检测miRNA的新方法(称为aLHCD)，该方法包括：(a)将含miRNA的样品与双发夹核酸杂交探针进行液相杂交，从而形成含“miRNA-杂交探针”的第一复合物的液相混合物；(b)对第一复合物，用限制性内切酶进行消化，形成一端保留发夹结构区的第二复合物；(c)用单链外切酶对第二复合物进行消化，形成第三复合物；(d)以经双重消化的核酸探针为模板，用引物进行PCR扩增；(e)检测PCR扩增产物的存在与否和/或数量，得出待测miRNA的检测结果。本发明方法具有高特异、高灵敏和便利性等特点，不仅可同时检测多种miRNA，还可区分miRNA及其前体。本发明方法可应用于生物学检测和临床医学。

主权项

一种miRNA检测方法，其特征在于，包括步骤：(a)将含miRNA的样品与核酸杂交探针进行液相杂交，从而形成含“miRNA‑杂交探针”的第一复合物的液相混合物，其中所述的核酸杂交探针为双发夹核酸探针，并且所述的双发夹核酸探针具有：(i)位于5'端的第一发夹结构区；(ii)位于3'端的第二发夹结构区；以及(iii)位于所述第一发夹结构区和第二发夹结构区之间的、与待检测的miRNA互补的互补结合区；(b)对所述的“miRNA‑杂交探针”第一复合物，用限制性内切酶进行消化，从而从所述第一复合物中切除第一发夹结构区或第二发夹结构区，形成一端保留发夹结构区的、经酶切的第二复合物，其中所述的限制性内切酶仅切除第一发夹结构区或第二发夹结构区而不切割第一复合物的其他区域；(c)用单链外切酶对所述第二复合物进行消化，从而切除所述第二复合物中在步骤(b)中切除发夹结构区所暴露出的核酸单链，形成第三复合物，并同时切除多余的未杂交探针，其中所述第三复合物由经双重消化后的核酸探针和miRNA构成；(d)以所述的经双重消化的核酸探针为模板，用引物进行PCR扩增，从而获得PCR扩增产物，其中所述扩增产物含有对应于所述待测miRNA序列的核酸序列区；(e)检测所述PCR扩增产物的存在与否和/或数量，从而得出待测miRNA的检测结果。