一种医用无菌无热源鱼皮胶原蛋白海绵的制备方法

摘要

本发明属于生物医用材料制备领域，特别涉及一种鱼皮胶原蛋白海绵的制备方法，经过前处理、酸溶、盐析、透析纯化、超滤膜浓缩、除菌、除热源和冻干得到医用无菌无热源鱼皮胶原蛋白海绵。本发明使用了成本低廉、且更加安全的鱼皮作为胶原蛋白海绵的来源，不需要经过交联的步骤就能得到高纯度、低灰分的医用胶原蛋白海绵。

主权项

一种医用无菌无热源鱼皮胶原蛋白海绵的制备方法，其特征在于步骤如下：（1）去除鱼皮上的鱼肉及脂肪，用10‑50倍鱼皮重量的清水清洗2次，将洗净的鱼皮剪碎成0.5～5cm²的小块；（2）用10‑50倍鱼皮重量的1%～10%NaCl溶液搅拌下漂洗鱼皮32h～48h，每8h～12h更换一次NaCl溶液；（3）用10‑50倍鱼皮重量的去离子水漂洗4次，每次0.5～1h；（4）用10‑50倍鱼皮重量的0.1mol/L NaOH溶液搅拌下漂洗32h～48h，每8h～12h换一次NaOH溶液；（5）用10‑50倍鱼皮重量的去离子水漂洗4次，每次0.5～1h，至pH6～7；（6）将经前述步骤（1）～（5）处理后得到的鱼皮置于0.3～1.0mol/L的稀酸缓冲液中溶胀，搅拌4h～12h后离心，取上清液，得到鱼皮粗胶原提取液；（7）鱼皮粗胶原提取液经5μm滤膜过滤，加入饱和NaCl或(NH₄)₂SO₄溶液盐析，蛋白析出；静置数小时后离心，得到胶原沉淀；（8）将胶原沉淀重新溶解于3‑5倍鱼皮重量的纯水中，以5‑20倍鱼皮重量的纯水为透析外液，半透膜截流分子量100KDa，对胶原蛋白进行透析纯化；（9）取纯化胶原液用30KD～50KD分子量的超滤膜浓缩，至胶液中蛋白浓度达到1%～4%；（10）浓缩后的胶液用0.22μm～0.45μm板式膜进行除菌，然后加入0.1%～5%（w/v）药用活性炭搅拌后过滤，以去除热源；（11）胶液置于‑60℃低温冷冻干燥机冻干，得到胶原蛋白海绵。