长链金属硫蛋白基因MTT1的优化及植物表达载体构建

摘要

本发明公开了一种经密码子优化的嗜热四膜虫金属硫蛋白MTT1植物表达载体及其应用。该载体按照如下步骤的方法得到：在不改变氨基酸序列的前提下，按照芦苇偏爱密码子对嗜热四膜虫金属硫蛋白MTT1进行优化设计，综合考虑密码子使用频率，GC含量及mRNA二级结构等影响因素，使其利于在芦苇、烟草等植物中高效表达，并在基因序列两端预留NcoI和EcoRI酶切位点。然后用NcoI和EcoRI双酶切植物表达载体pCAMBIA-1302和金属硫蛋白基因MTT1两端NcoI和EcoRI酶切位点，回收植物表达载体片段和金属硫蛋白基因片段，经DNAT₄连接酶将二者连接成金属硫蛋白植物表达载体。经将表达载体pCAMBIA-1302-MTT1转化农杆菌侵染烟草组培证实，原生生物金属硫蛋白可以在植物中表达。该载体还可以借助根瘤农杆菌转化芦苇及其他植物，获得具有清除环境中有毒有害重金属离子的植株。

主权项

一种长链金属硫蛋白植物表达载体，包括按照芦苇偏爱密码子优化合成的，适合在芦苇中表达的嗜热四膜虫金属硫蛋白MTT1基因，及该基因与植物表达载体pCAMBIA‑1302构建而成的表达质粒pCAMBIA‑1302‑MTT1，其特征在于，所需载体包含：按照芦苇偏爱密码子优化合成的长链嗜热四膜虫金属硫蛋白MTT1核苷酸序列为SEQ ID No.2，测序结果见图1；MTT1基因连接在表达质粒pCAMBIA‑1302上。