消除克雷伯氏肺炎杆菌合成2，3-丁二醇和乙偶姻能力的方法

摘要

本发明公开了一种消除克雷伯氏肺炎杆菌合成2，3-丁二醇和乙偶姻能力的方法，该方法通过对克雷伯氏肺炎杆菌2，3-丁二醇合成途径中乙酰乳酸脱羧酶基因进行失活，从而阻断乙酰乳酸转化成乙偶姻的催化反应。利用本发明，在克雷伯氏肺炎杆菌利用甘油合成1，3-丙二醇时，消除了副产物2，3-丁二醇和乙偶姻的合成，提高了甘油向1，3-丙二醇的转化率。

主权项

一种提高克雷伯氏肺炎杆菌合成1,3‑丙二醇的方法，包括如下步骤：1)利用PCR扩增克雷伯氏肺炎杆菌乙酰乳酸脱羧酶基因，通过TA克隆方法连接到克隆载体，并进行序列测定；2)利用步骤1)克隆到的基因序列，制备两侧连有乙酰乳酸脱羧酶基因的同源臂、中间连接抗性基因的DNA片段；3)利用转化或接合方法，将步骤2)制备的DNA片段转入到克雷伯氏肺炎杆菌中，利用同源重组与克雷伯氏肺炎杆菌染色体上的乙酰乳酸脱羧酶基因进行重组，筛选获得乙酰乳酸脱羧酶基因失活的菌株；4)利用前述步骤获得的乙酰乳酸脱羧酶基因失活的菌株，以甘油为底物发酵生产1,3‑丙二醇；乙酰乳酸脱羧酶是催化乙酰乳酸脱羧形成乙偶姻的酶，酶国际系统分类编号EC4.1.1.5，克雷伯氏肺炎杆菌乙酰乳酸脱羧酶基因基因阅读框为SEQ ID NO.4所示。