艰难梭菌二元毒素的LAMP检测方法及其专用引物与试剂盒

摘要

本发明公开了一种艰难梭菌二元毒素的LAMP检测方法及其专用引物与试剂盒。本发明是根据艰难梭菌特异性保守基因cdtA和cdtB设计引物，然后以待测物的基因组DNA为模板，在获得引物的引导下进行LAMP扩增，再通过反应液的颜色变化或反应液浊度变化来快速定性检测待测样品是否携带艰难梭菌二元毒素；本发明可实现单独或同时检测艰难梭菌cdtA或/和cdtB，不需要复杂仪器即可在等温条件下快速、方便、同步、高效、高特异、高灵敏地检测，可为艰难梭菌二元毒素的检测及毒素分型提供新的技术平台，指导临床诊疗及预防艰难梭菌高毒力菌株的暴发性流行，用于基层医疗卫生单位和各疾病预防控制中心筛查和检测艰难梭菌二元毒素，具有广阔的市场前景和较大的经济、社会效益。

主权项

一种艰难梭菌二元毒素的LAMP检测方法，其特征在于：包括如下步骤：（1）引物的设计：分别对艰难梭菌cdtA和cdtB重复序列通过BLAST软件进行同源性分析获得艰难梭菌特异保守序列，再根据艰难梭菌特异保守DNA序列，用软件Primer design V4设计分别得到用于对艰难梭菌cdtA和cdtB进行LAMP检测的引物；（2）LAMP扩增：以待测物的基因组DNA为模板，在上述引物的引导下进行LAMP扩增；所述的待测物为人及动物的粪便或培养分离的菌株；（3）扩增反应结束后进行结果判定：扩增反应前预先在反应液中添加钙黄绿素指示剂，根据反应后反应液的颜色变化判断结果，反应液的颜色变绿色表示待测物样品中存在艰难梭菌二元毒素，反应液的颜色变橙色表示待测样品中不存在艰难梭菌二元毒素；或者不添加钙黄绿素指示剂直接用浊度仪检测反应前后反应液的浊度变化来判断结果，反应液浊度上升表示待测物样品中存在艰难梭菌二元毒素，反应液浊度无变化表示待测样品中不存在艰难梭菌二元毒素。