一种基于PCR的核酸传感器快速检测方法

摘要

本发明公开了一种基于PCR的核酸传感器快速检测方法，设计针对待检物目标序列的上下游特异性引物，特异性引物序列与特异性引物5’端的Tag序列通过C9九个碳原子进行连接，将特异性引物置于PCR反应体系中进行扩增得到扩增产物，将上游特异性引物Tag序列的互补序列固定于硝酸纤维素膜上，下游特异性引物Tag序列的互补序列3’端进行修饰后与胶体金颗粒相连接，通过扩增产物末端Tag序列与胶体金颗粒上序列互补，配合胶体金层析试纸进行快速检测。本发明方法操作简便，无需对待测样品进行复杂的前处理，检测成本低，检测结果准确可靠，且本发明可用于所有生物目标序列的检测，通过PCR体系扩增实现待检测物目标序列的定性分析。

主权项

一种基于PCR的核酸传感器快速检测方法，其特征在于，包括如下步骤：1）设计得到一对针对待检物目标序列的特异性引物，分别记为F‑Primer和R‑Primer；2）设计一段与特异性引物F‑Primer的5’端Tag序列互补的序列，记为序列T；设计一段与特异性引物R‑Primer的5’端Tag序列互补并3’端巯基修饰的序列，记为序列A；合成一段特异性引物R‑Primer的5’端Tag序列，记为序列C；3）将序列T与序列C分别固定于硝酸纤维素膜上，序列A的3’端进行修饰后的序列与胶体金连接，得到金标产物B；4）提取样品总RNA/基因组DNA，将总RNA通过反转录获得cDNA；将cDNA/基因组DNA样品、特异性引物F‑Primer和特异性引物R‑Primer置于含有Taq聚合酶的PCR扩增反应体系中进行扩增，得到扩增产物；5）扩增产物与金标产物B混合后，置于步骤3）已处理的硝酸纤维素膜上进行侧向层析，通过胶体金层析试纸检测扩增产物中是否存在与序列T互补的末端带单链Tag序列的双链DNA，确定待检物是否存目标序列。