一种利用超高效液相色谱串联四级杆质谱分析婴儿乳粉中唾液酸的方法

摘要

本发明公开了一种利用超高效液相色谱串联四级杆质谱分析婴幼儿乳粉中唾液酸的方法。本发明在原有高效液相色谱法检测乳粉中唾液酸的基础上，结合超高效液相色谱(UPLC)技术，对样品中三种形式唾液酸进行提取，从而建立了灵敏度更高、更快速的超高效液相色谱串联质谱检测婴幼儿配方乳中唾液酸的方法。采用本发明的方法唾液酸的平均回收率在84.3%～98.9%之间，相对标准偏差为4.9%～8.2%；唾液酸的最低检测限为0.01μg/mL。该方法简单而方便操作，采用了较好的分离方式，基质效应较小，前处理采用了水解后高速离心的过程，简便宜于操作，有效避免了复杂样品前处理过程中唾液酸的损失，提高了回收率。

主权项

一种利用超高效液相色谱串联四级杆质谱分析婴幼儿乳粉中唾液酸的方法，其特征在于包括以下步骤：(1)绘制标准曲线；(2)样品的前处理：对样品中三种形式唾液酸进行提取，所述的三种形式唾液酸分别为游离唾液酸、低聚糖结合唾液酸以及蛋白结合唾液酸；提取得到的三种形式唾液酸溶液分别采用HLB聚合物填料的固相萃取柱净化，采用超纯水作为淋洗液，氨水‑甲醇混合溶液作为洗脱液；(3)将步骤(2)得到的净化后的提取物溶液混合后，调节pH值至2.5～3，用乙腈定容，0.22μm有机滤膜过滤，用UPLC‑ESI‑MS/MS进行测定；(4)质谱分析条件的选择及参数：离子源：电喷雾离子源；扫描方式：正离子扫描；检测方式：多反应监测系统；毛细管电压：3.0KV；锥孔电压：45V；源温度：150℃；脱溶剂温度：450℃；脱溶剂气流量：650L/hr；锥孔反吹气流量：50L/hr；碰撞气流量：0.24mL/min；光电倍增器电压：650V；(5)色谱分离条件：色谱柱及梯度洗脱：规格为50mm×2.1mm,1.7μm的Waters ACQUITY Ultra BEH HILIC超高效液相色谱柱；柱温：30℃；样品室温度：30℃；进样量：5μL；流速：0.25mL/min；流动相A：乙腈；流动相B：0.1％v/v甲酸水溶液；梯度洗脱的洗脱程序为：起始洗脱液中流动相A的体积百分比为90％，流动相B的体积百分比为10％，并维持至0.2min；0.2～0.4min，A由90％降至12％，B由10％升为88％，并维持至1.8min；1.8～2.2min，A由12％升为90％，B由88％降至10％。