一种基于核酸适体来检测目标分子的酶联分析新策略

摘要

本发明公开了一种基于发夹结构的核酸适体来检测目标分子的酶联分析新策略。该方法将核酸适体对目标分子的特异识别和辣根过氧化物酶的高效催化反应有机结合，核酸适体识别目标分子后，发夹结构打开并捕获另一互补短链DNA，用捕获的DNA作为报告元素转换出颜色信号，是一种高灵敏高特异的快速检测方法。本发明适合检测具有核酸适体的各种靶物质，尤其适合小分子靶标。由于本方法以可视化的信号作为输出结果，无需大型仪器为依托，样品也无需复杂的前处理步骤，尤其适合发展现场实时检测，可以被广泛的应用于医学诊断、生物分析、食品安全和环境监测等领域中。

主权项

一种基于发夹结构的核酸适体来检测目标分子的酶联分析新策略的检测方法，其特征在于，包括以下步骤：1)将检测DNA链A1固定到NHS活化的酶标板孔。洗涤酶标板。接着用BSA封闭未反应的NHS基团。再次洗涤酶标板。2)将包含目标分子和B1链的样品溶液加入到固定了A1的酶标板口，室温反应30‑50min后，倒掉反应液，洗涤酶标板。3)将包含HRP‑streptavidin的溶液加入到上步反应完毕的酶标板口，室温反应30min，倒掉反应液，洗涤酶标板。接着将TMB‑H₂O₂底物液加入酶标板口，室温反应20min，HRP催化TMB‑H₂O₂底物显蓝色，加酸终止反应变成黄色。4)测黄色产物在450nm处的紫外吸收值，根据净吸收值确定检测的线性关系。实际样品的吸收值和标准曲线对照确定目标的含量。