发明名称 |
一种油田污水中硫酸盐还原菌的分离纯化方法 |
摘要 |
本发明公开了一种油田污水中硫酸盐还原菌的分离纯化方法,具体包括以下步骤:(1)SRB富集培养基的制备;(2)SRB分离培养基的制备;(3)SRB的富集培养;(4)SRB的分离培养;(5)SRB的纯化培养,本发明具有分离纯化的速度快,从SRB富集和分离培养基的制备到纯化培养物只需要3d~5d,分离纯化的成功率高,一次分离纯化既可得到纯化培养物,操作简单、对操作人员要求较低,针对性强,本方法只适合进行SRB菌种分离纯化,因此,可广泛地应用于油田污水中硫酸盐还原菌的分离纯化中。 |
申请公布号 |
CN104312962A |
申请公布日期 |
2015.01.28 |
申请号 |
CN201410584993.1 |
申请日期 |
2014.10.27 |
申请人 |
中国石油化工股份有限公司;中国石油化工股份有限公司胜利油田分公司采油工艺研究院 |
发明人 |
潘永强;徐鹏;袁长忠;王刚;徐闯;李彩风;杜春安;王静;宋欣;张守献;曹嫣镔 |
分类号 |
C12N1/20(2006.01)I |
主分类号 |
C12N1/20(2006.01)I |
代理机构 |
北京世誉鑫诚专利代理事务所(普通合伙) 11368 |
代理人 |
郭官厚 |
主权项 |
一种油田污水中硫酸盐还原菌的分离纯化方法,其特征在于,该方法具体包括以下步骤:(1)SRB富集培养基的制备将富集培养基溶于蒸馏水中,厌氧分装到容积为7.8ml的厌氧瓶中,每瓶分装7ml,121℃高压蒸汽灭菌,其中,富集培养基配方为乳酸钠质量浓度0.4%~0.6%、硫酸亚铁铵质量浓度0.05%~0.2%、酵母浸粉质量浓度0.05%~0.1%、氯化钠质量浓度0.5%~2.0%、氯化镁质量浓度0.01%~0.03%;(2)SRB分离培养基的制备将分离培养基溶于蒸馏水中,加热至充分溶解,然后厌氧分装到容积为7.8ml的厌氧瓶中,每管7ml,121℃高压蒸汽灭菌,灭菌完后自然降温至50℃~55℃备用,其中,分离培养基配方为蛋白胨质量浓度0.8%~1.2%、肉浸粉质量浓度0.9%~1.1%、乳酸钠质量浓度0.4%~0.6%、硫酸亚铁铵质量浓度0.05%~0.2%、酵母浸粉质量浓度0.05%~0.1%、氯化钠质量浓度0.5%~2.0%、氯化镁质量浓度0.01%~0.03%、琼脂粉质量浓度0.8%~1.5%;(3)SRB的富集培养取油田污水0.2ml注入上述制备好的富集培养基中,恒温培养至培养液变黑为止,得到富集培养物;(4)SRB的分离培养取0.77ml上述富集培养物用制备好的富集培养基按照10倍系列稀释法稀释至10<sup>‑4</sup>,将10<sup>‑3</sup>和10<sup>‑4</sup>梯度的稀释液用1ml无菌注射器取0.1ml,分别缓慢注入至上述50℃~55℃备用的分离培养基中,混合均匀,垂直静置放置0.5h~1h得到透明的半固体培养基,然后置于恒温培养箱中培养,培养至培养基中出现黑点为止,得到分离培养物;(5)SRB的纯化培养取1管上述富集培养基,用1ml无菌注射器抽取0.2ml富集培养基,接着用该注射器吸入分离培养物中轮廓清晰的黑点,然后注入该管富集培养基中,放置在恒温培养箱中培养,直到培养液变黑,得到纯化培养物。 |
地址 |
100728 北京市朝阳区朝阳门北大街22号 |