一种那西肽活跃链霉菌高产菌株的高通量筛选方法

摘要

本发明提供了一种那西肽活跃链霉菌高产菌株的高通量筛选方法，利用新型ARTP育种系统诱变那西肽活跃链霉菌，通过响应面法优化24深孔板发酵条件，并且利用24深孔板培养法建立高通量筛选突变体的方法，获得高产稳产那西肽突变株。本发明验证24深孔板效价及摇瓶效价之间的相关性，使其筛选方法非常准确快速，同时与传统摇瓶发酵筛选相比，24深孔板法能显著提高那西肽高产菌株的筛选效率。

主权项

一种那西肽活跃链霉菌高产菌株的高通量筛选方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)采用常压室温等离子体处理那西肽活跃链霉菌150s；(2)将诱变后待筛选的那西肽活跃链霉菌稀释涂布于固体平板，在37±0.5℃下培养72h；(3)用牙签挑取诱变后的单菌落孢子接入每孔装有4～6mL固体培养基的24深孔板中进行固体培养，同时一一对应地用接种铲挖0.2～0.3cm2的菌体接入装有2.55mL种子培养基的24深孔板进行液体培养；种子培养结束分别转接装有0.93mL发酵培养基的24深孔板，发酵培养结束测效价，对应的固体培养孔板菌落作保存，液体培养28±0.5℃，转速260r/min，种子培养40h，发酵120h，固体培养37±0.5℃，72h；(4)接种24深孔板固体培养的菌落于斜面试管培养好后用于摇瓶发酵，测效价。