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Un método de amplificación específica de alelo de una variante de una secuencia diana, que existe en forma de varias secuencias variantes, que comprende (a) proporcionar una muestra, que contiene posiblemente al menos una variante de una secuencia diana; (b) proporcionar un primer oligonucleótido, al menos parcialmente complementario de una o más variantes de la secuencia diana; (c) proporcionar un segundo oligonucleótido, al menos parcialmente complementario de una o más variantes de la secuencia diana, que tiene un nucleótido 3' terminal complementario de solamente una variante de la secuencia diana; en el que dicho segundo oligonucleótido incorpora al menos un nucleótido con una base modificada covalentemente en el grupo amino exocíclico, en el que dicha base se selecciona de un grupo que consiste en N6-bencil-adenina, N6-para-terc-butil-bencil adenina, N2-alquil-guanina y N4-bencil-citosina; (d) proporcionar condiciones adecuadas para la hibridación de dichos primero y segundo oligonucleótidos con al menos una variante de la secuencia diana; y (e) proporcionar condiciones adecuadas para la extensión de oligonucleótido por un biocatalizador que incorpora nucleótidos; en el que dicho biocatalizador es capaz de extender dicho segundo oligonucleótido cuando se hibrida con la variante de la secuencia diana para la que tiene dicho nucleótido 3' terminal complementario, y sustancialmente menos cuando dicho segundo oligonucleótido hibrida con la variante de la secuencia diana para la que tiene un nucleótido 3' terminal no complementario. |
