人群苯丙酮尿症PAH基因筛查试剂盒

摘要

本发明公开了一种同时检测人群苯丙酮尿症苯丙氨酸羟化酶(PAH)基因12个突变热点的试剂盒，所述试剂盒以人群PAH基因上的12个位点为检测对象，针对每个位点的突变类型分别设计出扩增引物和延伸引物，针对各个目的区段同时进行PCR扩增和标记延伸，通过毛细管电泳分析，一次获得12个突变热点的基因型。本发明针对人群苯丙酮尿症PAH基因突变的12个热点，提供一种简单、高通量、高效能、低成本、检测准确的适合人群的苯丙酮尿症PAH基因突变筛查用试剂盒，适用于人群苯丙酮尿症的群体性筛查。

主权项

中国人群苯丙酮尿症PAH基因筛查试剂盒，其特征在于，该试剂盒包含以下内容：(1)反应试剂，包括dNTP、5×和10×PCR缓冲液、Mg²⁺离子、FastTaq酶、SNaPshot Multiplex混合液、包括SAP酶、Exon I酶及其配套的缓冲液的纯化试剂、包括单个位点纯合、杂合突变的阳性对照DNA样本、阴性对照DNA样本；(2)按一定比例混合的针对PAH基因突变热点所在的8个外显子进行多重PCR扩增的正向引物和反向引物；(3)按一定比例混合的针对PAH基因12个突变热点的PCR延伸引物；所述试剂盒以PAH基因的168位点G→T突变、331位点C→T突变、IVS4—1位点G→A突变、482位点T→C突变、611位点A→G突变、721位点C→T突变、728位点G→A突变、782位点G→A突变、977位点G→A突变、1033位点G→A突变、1068位点C→A突变和1238位点G→C突变共12个PAH基因突变热点为检测对象，针对每个位点的突变类型分别设计出扩增引物和延伸引物，针对各个目的区段同时进行多重PCR扩增和标记延伸，通过毛细管电泳分析，在一个反应管中一次可以获得以上12个位点的基因分型；所述PAH基因168位点的扩增引物序列是5'‑TTCATGCTTGCTTTGTCC‑3’和5'‑TTCAAATCTGCCTGTTCC‑3’；所述PAH基因331位点的扩增引物序列是5’‑GGGTATAACCAAGGGAAGG‑3’和5’‑CTCAACAAGCAAGGCAGA‑3’；所述PAH基因IVS4—1位点的扩增引物序列与所述PAH基因482位点的扩增引物序列一致，为5’‑GGGTATAACCAAGGGAAGG‑3’和5’‑CTCAACAAGCAAGGCAGA‑3’；所述PAH基因611位点的扩增引物序列是5’‑CCCCGACTCCCTCTGCTAA‑3和5’‑TGCCTCCACATACTTGTCTTCC‑3’；所述PAH基因721位点的扩增引物序列与所述PAH基因728位点和782位点的扩增引物序列一致，为：5’‑CGTCAAAGCCTATGTCCC‑3’和5’‑GCAATGAACCCAAACCTC‑3；所述PAH基因977位点的扩增引物序列是5’‑CCCTCCAGAAACACCCTCATAG‑3’和5’‑CCCACAGCCATCATCAAATC‑3’；所述PAH基因1033位点的扩增引物序列与所述PAH基因977位点的扩增引物序列一致，为：5’‑CCCTCCAGAAACACCCTCATAG‑3’和5’‑CCCACAGCCATCATCAAATC‑3’；所述PAH基因1068位点的扩增引物序列是：5’‑GGGCTGTGATGTAGAAGG‑3’和5’‑CACCTTTGTCACCACCTC‑3’；所述PAH基因1238位点的扩增引物序列是5’‑TAGGGAGGTGTCCGTGTT‑3’和5’‑TGTGGAAAGGTGGAATGA‑3’。