盐藻的收集与保种方法

摘要

本发明公开了一种盐藻的收集与保种方法，属水产养殖领域。盐藻收集传统上采用离心法获得，该法易打碎细胞，胞液外流，造成损失，设备昂贵且运行费用高。本发明提供的利用甲壳素、聚丙烯酰胺和小苏打作凝絮剂来凝聚藻细胞方法，操作简便，费用少，设备简单且对细胞没有伤害，细胞获得率高，没有污染，效益高。盐藻保种传统上采用低温、低光照液体保存法，操作麻烦，费时费力，保种时间短，易污染，死亡率高，技术要求高，易失败。本发明公开的低温冰冻保种法，保种时间长，操作方便，不易污染且花钱少，冰冻时添加了冷冻保护剂，细胞成活率从原来的21％提高到92％，经济效益高，具有推广价值。

主权项

一种盐藻的收集与保种方法，其特征在于步骤如下：将培养完毕的盐藻液，按1升藻液加入100毫克甲壳素和50毫克聚丙烯酰胺的量加入甲壳素和聚丙烯酰胺，搅拌30分钟，再按1升藻液加入80毫克小苏打(即碳酸氢钠)的量加入小苏打，再搅拌30分钟，后将藻液置于黑暗中静置、沉淀24小时，可见底部有牙膏状沉淀物，即为目的产物藻泥，弃去上清液可得；因上清液中还有少量盐藻细胞，将上清液搅拌20分钟，再沉淀24小时，再取牙膏状沉淀物即可；盐藻保种用的培养液，配方如下：硝酸铵4毫克，磷酸二氢钠7毫克，脯氨酸2毫克，丙酮酸盐5毫克，柠檬酸钾2毫克，甘氨酸甜菜碱12毫克，谷氨酸钠4毫克，乙酸钠4毫克，甘露醇6毫克，葡萄糖9毫克，人尿1.5毫升，甘油3毫克，二甲亚砜0.5毫克，链霉素0.1毫克，煮沸冷却后的海水1000毫升；用一个150毫升的三角烧瓶，装入上述培养液100毫升，取生长旺盛、无污染的盐藻接种至密度达到每毫升40万个细胞，塑料薄膜封口，在光照培养箱中培养72小时，温度24℃，光照强度4500lux，然后用报纸包裹三角烧瓶，转入4℃冰箱，放置12小时，再转入0℃冰箱，放置12小时，转入‑10℃冰箱，放置12小时，最后转入‑16℃冰箱，长期黑暗放置保种，最多可保种24个月，后取出解冻，按‑16℃、‑10℃、0℃、4℃、24℃依次放置12小时的顺序依次逐渐解冻和升温，后加入50毫升新鲜培养液，细胞可在48小时后恢复活力，依靠鞭毛自由游动。