一种用于检测猪瘟病毒的重组抗原的制备方法

摘要

本发明公开了一种用于检测猪瘟病毒的重组抗原的制备方法，一种用于检测猪瘟病毒的重组抗原的制备方法，包括如下步骤：基因合成，构建重组表达载体，含有猪瘟病毒E2重组蛋白的表达，将重组表达质粒转化至大肠杆菌中，进行诱导表达，诱导之后，收集菌体；含有猪瘟病毒E2重组蛋白的纯化及复性。本发明提供的用于检测猪瘟病毒的重组抗原的制备方法，对猪瘟病毒主要抗原表位所在的E2全片段进行重组表达,这样就保留了全部E2的抗原决定簇位点,进而有效的避免了假阴性即漏检现象；具有生产周期短,产量高,成本低的优点。

主权项

一种用于检测猪瘟病毒的重组抗原的制备方法，其特征在于，包括如下步骤： 步骤a，基因合成，设计引物进行PCR反应，得到猪瘟病毒的E2基因序列如SEQ ID No：1所示； 步骤b，构建重组表达载体，步骤a中的基因序列测序成功后，将该基因序列用限制性内切酶进行双酶切之后，插入到用相同两个酶切处理的质粒表达载体中； 步骤c，合有猪瘟病毒E2重组蛋白的表达，将步骤b中的重组表达质粒转化至大肠杆菌中，进行诱导表达，诱导之后，收集菌体； 步骤d，合有猪瘟病毒E2重组蛋白的纯化及复性，将步骤c收集的菌体破碎提取重组蛋白，然后进行纯化及复性，得到重组蛋白氨基酸序列如SEQ ID No：28所示。