一种可注射骨髓间充质干细胞外基质/琼脂糖复合水凝胶及其制备方法和应用

摘要

本发明公开了一种可注射骨髓间充质干细胞外基质/琼脂糖复合水凝胶及其制备方法和应用。本发明通过体外单层高密度培养兔的骨髓间充质干细胞，收集其分泌的细胞外基质，利用冷冻干燥、液氮下研磨及酶促消化技术获得均匀的细胞外基质混悬液。接着将细胞外基质混悬液与琼脂糖等体积充分混匀，制备成骨髓间充质干细胞外基质/琼脂糖复合水凝胶材料。该材料通过简单的注射方式即可注入任意形状的软骨缺损部位，并且与周边宿主组织有较佳的附着整合能力。本发明可注射自体骨髓间充质干细胞外基质/琼脂糖复合水凝胶，其细胞来源充足，避免了异体来源材料存在的潜在风险，并且便于修复任意形状的软骨缺损，达到与周边宿主组织更好的整合。

主权项

一种可注射骨髓间充质干细胞外基质/琼脂糖复合水凝胶的制备方法，其特征在于包括以下步骤：制备骨髓间充质干细胞来源的细胞外基质混悬液：将冻干的骨髓间充质干细胞外基质支架研磨成粉末，将粉末状的细胞外基质溶于含有0.5‑1.5mg/ml胃蛋白酶的0.01mol/L盐酸中消化，并在20‑25℃下搅拌60～72小时，待细胞外基质完全消化后加入0.1mol/L NaOH终止消化反应，最终获得均匀的骨髓间充质干细胞来源的细胞外基质混悬液；制备骨髓间充质干细胞外基质/琼脂糖复合水凝胶：配制4％的琼脂糖溶液，经高压真气灭菌，待温度降至40～45℃时，将上一步制备的细胞外基质混悬液与4％琼脂糖以等体积混合，轻轻摇晃使其充分混匀，静置2～3分钟后即获得骨髓间充质干细胞外基质/琼脂糖复合水凝胶。