一种天然组织来源的脱细胞骨膜材料及其制备方法

摘要

本发明公开了一种天然组织来源的脱细胞骨膜材料及其制备方法，本发明取任一哺乳动物四肢骨骨膜，摘除骨性碎片，无菌PBS漂洗3次，然后在浓度为5%的含10KIU/ml蛋白酶抑制剂的PBS缓冲液，在摇床200rpm震荡1小时；接着在浓度为5%的含TritonX-100的PBS缓冲液，加入混合抗菌液，在摇床250rpm震荡48小时；再在浓度为10%的含SDS的PBS缓冲液，加入混合抗菌液，在摇床250rpm震荡48小时；最后在浓度为1.5mg/ml的含DNA酶的PBS缓冲液，加入混合抗菌液，在摇床250rpm震荡12小时；本发明取材广、可批量生产、得到的骨膜材料安全性高。

主权项

一种天然组织来源的脱细胞骨膜材料及其制备方法，其特征在于，该方法具体包括以下步骤：（1）取任一哺乳动物四肢骨骨膜，摘除骨性碎片，无菌PBS漂洗3次，每次漂洗20分钟，去除血液、残余肌肉组织和脂肪组织；再用去离子水冲洗4小时；（2）在浓度为5%的含10KIU/ml 蛋白酶抑制剂的PBS缓冲液，恒温45^oC摇床200rpm震荡1小时；用去离子水冲洗4小时；（3）在浓度为5%的含Triton X‑100的PBS缓冲液，加入10KIU/ml，10g/ml的混合抗菌液，缓冲液和混合抗菌液体积比为5：1，恒温45^oC摇床250rpm震荡48小时；再用去离子水冲洗4小时，所述的混合抗菌液由青霉素和链霉素组成，青霉素和链霉素的体积比为1：1；（4）在浓度为10%的含SDS的PBS缓冲液，加入10KIU/ml，10g/ml的混合抗菌液，缓冲液和混合抗菌液体积比为5：1，恒温45^oC摇床250rpm震荡48小时；用去离子水冲洗4小时，所述的混合抗菌液由青霉素和链霉素组成，青霉素和链霉素的体积比为1：1；（5）在浓度为1. 5mg/ml的含DNA酶的PBS缓冲液，加入10KIU/ml，10g/ml的混合抗菌液，缓冲液和混合抗菌液体积比为5：1，37^oC摇床250rpm震荡12小时；用去离子水冲洗4小时后得到全椎间盘脱细胞支架，所述的混合抗菌液由青霉素和链霉素组成，青霉素和链霉素的体积比为1：1。