一种用单条染色体构建文库方法

摘要

本发明提供一种用单条染色体构建文库方法，本发明采用分轮扩增的办法，消除了PCR随机偏向性问题；内切酶可选余地大，灵活，粘性末端连接效率高；使用人为设计的接头作特异引物，可用较高的退火温度，消除了非特异性扩增问题，采用超声随机打断后，通过加A反映，然后加接头的做法，属于本发明的扩展，与高通量测序技术相结合进行物种的基因组从头测序，将消除基因组测序中多染色体高杂合度不能正确组装和染色间组装错误问题，为基因组测序开辟广阔的前景。

主权项

一种用单条染色体构建文库方法，其特征在于：包括以下步骤： (1)对单染色体中的蛋白酶K灭活，加入酶切体系，酶切。 (2)加入等量的正反向单链接头，制作通用接头。加入适量的接头到酶切产物中，使接头与酶切片段连接。 (3)向连接产物中加入PCR扩增体系，利用小循环多次扩增的方式进行扩增，期间对每轮的产物合管混合后再分管以降低PCR偏好。