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一种微液滴式PCR芯片，其特征在于，该芯片采用双层设计，上层为PDMS图形化盖片，下层为玻璃基底，上、下两层采用真空氧等离子体键合封装为一个完整的微液滴PCR芯片； 所述PDMS图形化盖片具体包括：DNA目标片段与引物注入口、单相液滴成型微结构、PCR反应酶和mRNA底物注入口、油相试剂注入口、液滴直线通道、十字混合通道、微液滴缓冲通道、微液滴PCR反应腔室及微液滴PCR废液腔室，所述PDMS图形化盖片采用负胶显影图形化、PMDS倒模得到；其中：DNA目标片段与引物注入口、PCR反应酶和mRNA底物注入口、油相试剂注入口为并行的3个试剂注入口，每个注入口均设置有单相液滴成型微结构；液滴直线通道、十字混合通道、液滴缓冲通道为从左至右相互连接的试剂混合与流通通道；微液滴PCR反应腔室与液滴缓冲通道相连，微液滴PCR废液腔室与微液滴PCR反应腔室相连；将油相试剂通过油相试剂注入口注入，并通过油相试剂注入口流过十字混合通道与微液滴缓冲通道，进入微液滴PCR反应腔室，这样油相试剂就会预先浸没整个混合区域，为后续得到PCR微液滴创造一个连续环境；再将DNA目标片段及DNA引物和PCR反应酶、mRNA底物分别注入到DNA目标片段与引物注入口、PCR反应酶和mRNA底物注入口，流经单相液滴成型微结构，利用单相液滴成型微结构的多层过滤特性将大分子物质滤出，大分子物质逐一分离得到均一稳定的单相液滴；液滴通过液滴直线通道形成粒径大小相同的或相近的物质，待通过液滴直线通道后和十字混合通道的油相环境混合，十字混合通道的尺寸逐步变小，提供毛细作用将PCR反应的各个大分子物质包裹一层油相物质，进而形成微环境独立的微液滴结构；微液滴通过微液滴缓冲通道稳定后，储存在微液滴PCR反应腔室中，并为后续的PCR反应提供微液滴环境和相应试剂物质； 所述单相液滴成型微结构采用一级滤网和二级滤器解耦，所述一级滤网为对称的扇叶状结构；所述二级滤器三列并排设置，每一列都由间距均匀的方块形PDMS阻流块构成，列与列间隔相同，阻流块间距逐列减小。 |
