一种干细胞培养基及其应用和干细胞培养方法

摘要

本发明公开一种干细胞培养基及其应用和干细胞培养方法，所述干细胞培养基中不含血清，所述干细胞培养基包括氨基酸、维生素、盐类、脂类、细胞因子和蛋白多肽。所述干细胞培养基适合于快速培养人及哺乳动物组织来源的干细胞，包括但不局限于脂肪间充质干细胞、骨髓间充质干细胞和脐带血干细胞。该培养基能让细胞的扩增速度提高3-5倍，但又不影响其分化的潜能。采用该干细胞培养基与普通培养基相比，不仅能更快速扩增不同来源的干细胞，延长了传代次数，而且又能很好的保持干细胞的潜能性。

主权项

一种干细胞培养基，其特征在于，所述干细胞培养基中不含血清，所述干细胞培养基包括氨基酸、维生素、盐类、脂类、细胞因子和蛋白多肽；其中，所述氨基酸包括丙氨酸、精氨酸、天冬酰胺、天冬氨酸、半胱氨酸、谷氨酸、甘氨酸、组氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、赖氨酸、甲硫氨酸、苯丙氨酸、脯氨酸、丝氨酸、苏氨酸、色氨酸、酪氨酸、缬氨酸及谷氨酰胺；所述细胞因子和蛋白多肽包括成纤维细胞生长因子1、成纤维细胞生长因子2、表皮生长因子、血小板衍生生长因子、胰岛素、胰岛素样生长因子1、血管内皮细胞生长因子、胎盘生长因子、白血病抑制因子、 干细胞因子、转铁蛋白和人血清白蛋白；所述维生素包括生物素、氯化胆碱、D‑泛酸钙、叶酸、肌醇、烟酰胺、吡哆醇盐酸盐、核黄素、盐酸硫氨、辅酶Q10、维生素B12、腐胺二盐酸盐、维生素C和维生素E；所述脂类包括地塞米松、油酸、胆固醇、乙醇胺、亚油酸、硫辛酸和脂质混合物；所述盐类包括碳酸氢钠、氯化钙、氯化钾、氯化镁、硫酸镁、氯化钠、一水磷酸二氢钠、磷酸氢二钠和丙酮酸钠；所述干细胞培养基还包括抗氧化剂、D‑葡萄糖、牛磺酸、肝素钠；所述干细胞培养基以1升计算，包括以下组分：丙氨酸       0.01~0.25mM精氨酸       0.4~10 mM天冬酰胺     0.11~2.75 mM天冬氨酸     0.03~0.75 mM半胱氨酸     0.03~0.75 mM谷氨酸       0.03~0.75 mM甘氨酸       0.05~1.25 mM组氨酸       0.03~0.75 mM异亮氨酸     0.5~12.5 mM亮氨酸       0.24~6 mM赖氨酸       0.2~5 mM甲硫氨酸     0.12~3 mM苯丙氨酸     0.21~5.25 mM脯氨酸       0.004~0.1 mM丝氨酸       0.15~3.5 mM苏氨酸       0.06~1.5 mM色氨酸       0.02~0.5 mM酪氨酸       0.03~0.75 mM缬氨酸       0.28~7 mM谷氨酰胺     0.8~20 mM表皮生长因子            1‑10 mg纤维细胞生长因子1       1‑10 mg纤维细胞生长因子2       1‑10 mg胰岛素样生长因子1       1‑10 mg白细胞因子               1‑10 mg血小板衍生生长因子       1‑10 mg胎盘生长因子             1‑10 mg干细胞因子               1‑10 mg血管内皮细胞生长因子     1‑10 mg胰岛素           1~25 mg转铁蛋白         4~100 mg人血清白蛋白     0.02~0.5 g生物素            6~150mM氯化胆碱         12~300mM叶酸             1.2~30mM辅酶Q10         0.2~5mM地塞米松         2~50 nMD‑泛酸钠         1~25mM肌醇             14~350mM烟酰胺           4~100mM吡哆醇盐酸盐     0.03~0.75mM核黄素           0.11~2.75mM盐酸硫氨         0.11~2.75mM维生素B12       0.1~2.5mM腐胺二盐酸盐     0.1~2.5mM维生素C         2~50 mg维生素E         0.05~1.25 mg肝素钠           0.08~2 gD‑葡萄糖         3.6~90 mM还原性谷胱甘肽   0.0002~0.005 mg牛磺酸        0.00144~0.36 gβ‑巯基乙醇    0.01~0.25mg酚红          1.62~40.5 mg油酸          0.5~12.5 mg亚油酸        0.5~7.5 mg硫辛酸        0.02~0.5 mg脂质混合物    0.2~5 ml胆固醇        1~25 mg乙醇胺        12~300ml碳酸氢钠      2.32~58 mM氯化钙        0.0168~0.42 mM氯化钾        0.832~20.8 mM氯化镁        0.06~1.5 mM硫酸镁        0.0814~2.035 mM氯化钠        24.122~603.55 mM一水磷酸二氢钠     0.0906~2.265 mM磷酸氢二钠      0.1~2.5 mM丙酮酸钠        0.1~2.5 mM 。