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一种利用地衣芽孢杆菌制取饲料添加剂的方法，其特征在于包括如下步骤：（1）菌种制备与活化把购得的地衣芽孢杆菌的菌种制成悬浮液，加入无菌水稀释到浓度为10<sup>‑8</sup>时，在固体平板培养基上对其进行涂布分离或划线分离，挑取部分单菌落进行生产能力的测定；经反复筛选，确定出经发酵产生的芽孢活性强、活菌数高的菌株代替原来的菌株；（2）斜面菌种制作按配方要求配置斜面培养基,斜面培养基的各组份重量份为：牛肉膏5 g，蛋白胨10 g，NaCl 5 g，琼脂粉20‑25 g，加水定容至1000 mL；pH控制在7.2‑7.4；将斜面培养基加热使各组分充分溶解，调好pH，然后分装于若干支试管中，密封试管；将试管于121℃灭菌30 min,取出摆斜面，冷却后备用；将上述斜面培养基置于干燥箱或培养箱中放置24‑48h接入步骤（1）中制备的菌种，其中地衣芽孢杆菌接种量为试管中混合物总重量的1%，在37℃条件下培养24h，制成斜面菌种；（3）三角瓶液体菌种制作按配方要求配置液体培养基,液体培养基的各组份重量份为：蛋白胨2 g、牛肉膏3 g、酵母膏2 g、硫酸锰0.2 g、磷酸二氢钾0.4 g、磷酸氢二钾0.5 g、蔗糖20 g，加水定容至1000mL；pH控制在7.0‑7.2；分装于若干个500mL的三角瓶中，每支三角瓶装量为220mL；密封后在121℃温度下灭菌30min，冷却后备用；在无菌条件下，每个三角瓶中的液体培养基接入步骤（2）制得的斜面菌种，其中地衣芽孢杆菌接种量为三角瓶中混合物总重量的10%，对三角瓶进行摇床培养，温度控制在37℃，转速为180‑200 r/min；摇床培养24h后制得三角瓶液体菌种，备用；（4）罐头瓶固体发酵按配方要求配置固体发酵培养基,固体发酵培养基的各组份重量份为：红糖0.5％、石灰0.5％，无菌水45%，其余为麸皮；将固体发酵培养基混和均匀后分装入若干罐头瓶中，瓶口用报纸盖住，用线系紧；在121℃的温度下对上述罐头瓶灭菌60 min；冷却后，接入步骤（3）制取的液体菌种，其中地衣芽孢杆菌接种量为混合物总重量的5%；放入37℃的培养间中培养60 h，当芽孢形成率达到90%以上发酵结束，出料；将制得的物料进一步在发酵瓷盘中发酵，发酵温度控制在37℃，培养时间为60 h。 |
